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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃&-80℃
- 保质期:
3个月~12个月
- 英文名:
pOTB7-MCL1质粒
- 库存:
41
- 供应商:
上海禾午生物科技有限公司
- 规格:
2ug冻干粉&300ul甘油菌
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文献和实验浓度不同,两种引物浓度相差 100 倍。在最初 20 各循环中,主要产物是双链 DNA。当低浓度引物被耗尽后,高浓度引物引导的 PCR 就会产生大量单链 DNA,单链 DNA 可用于序列测定。 三、主要试剂 1. DNA 模板(1ng/μL)(质粒 R-pGEX-4T-1,R 指代外源基因) 2. 2.5mmol/LdNTP (TaKaRa) 3. 10×PCR 缓冲液(TaKaRa) 4. 25mmol/L MgCl 2 (TaKaRa) 5. 引物 1、引物 2(5pmol/μL) 引物
的上下游两端的序列连接起来,从而实现了目的基因的敲除。再如,可为细胞提供一个修复的模板质粒,这样细胞就可按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变。也可对受精卵细胞进行基因编辑,并将其导入代孕母体中,可实现基因编辑动物模型的构建。
,近年来人们较多采用此方法克隆基因启动子。苏宁等根据已报道的水稻叶绿体16SrRNA启动子基因序列设计5'启动子序列的引物,以水稻叶绿体DNA为模板,PCR扩增出16SrRNA基因5'启动子区的片段,酶切克隆到pSK的SacI和SphI位点,构建测序载体质粒pZ16S,进行序列测定,结果表明所克隆的片段长为144bp,含有SD序列。同源比较结果表明,所克隆的片段与水稻叶绿体16SrRNA启动子序列具有100%的同源性。上述的PCR方法简便、快捷、操作简单,是人们较为广泛使用的技术。1.3 环状PCR
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