DyLight405标记抗兔免疫荧光染色试剂盒

特别提示：包括DyLight405标记抗兔免疫荧光染色试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DyLight405标记抗兔免疫荧光染色试剂盒
英文名称：Immunol Fluorescence Staining Kit with DyLight405-Labeled Goat Anti-Rabbit IgG
产品货号：KFS045
产品规格：300T

适用于细胞或组织切片的免疫荧光染色。在有适当的一抗检测特定的目标蛋白时，就可以使用免疫荧光染色试剂盒检测到红色、绿色或蓝色等荧光。含有DyLight 405标记的山羊抗兔IgG(H+L)抗体，可以用于检测兔来源的相应一抗，观察到的颜色为非常鲜艳的蓝色。

DyLight405（Ex/Em：400nm/421nm）是一种常用的非常明亮的蓝色荧光探针。它比绝大部分常用的蓝色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。由于很多荧光检测仪器缺少400nm左右的激发波长，DyLight405常局限于激光共聚焦显微镜下观察。

本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液，可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月，并且在6个月内至少可以重复使用10次。

本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。

本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片，至少可以检测300个样品。

注意事项
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光，特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭，染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但存放时间通常不宜超过一周，随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
4. 如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度；如果荧光还是比较弱，可以适当提高荧光标记抗体的浓度。
5. 需自行配制用于免疫荧光染色的相关试剂，需自备盖玻片和载玻片。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

除了DyLight405标记抗兔免疫荧光染色试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：动物线粒体总蛋白提取试剂盒
货号：BTN130891
规格：50次

名称：改良Lowry法蛋白定量试剂盒
货号：BTN101102
规格：1000次
 Folin酚试剂(磷钼酸和磷钨酸混合物)跟蛋白质中含酚氨基酸(色氨酸和酪氨酸)发生颜色反应，可用于测定蛋白质浓度，但灵敏度较低。Lowry在此基础上加入Biuret(双缩脲)反应步骤，即先在碱性条件下使蛋白质和Cu+形成复合物，再使其与Folin酚试剂发生显色反应，产物在750nm检测。
 Lowry法使不含酚的蛋白质也能被检测出来，灵敏度是单独使用Folin酚的10倍左右，是双缩脲反应的200倍，因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。传统Lowry法受到很多常用的试剂(如DTT、糖、甘油、Triton等)干扰，步骤繁琐。本公司对Lowry法进行改良。
 Lowry检测原理图如下：


产品特点：
1．即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2．能抵抗部分干扰物(如一定浓度SDS或其他去污剂)的干扰。
3．检测线性范围广，在2-100μg，检测上限比经典Lowry法高30%-40%。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A成分一	208ml
溶液A成分二	16ml
溶液A成分三	16ml
溶液B	80ml
溶液C	80ml
福林酚	10mL(用100mL 棕色瓶)
BSA标准品(2mg/mL in水)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、准备工作
1．制备溶液A：将16mL溶液A成分二和16mL溶液A成分三加入到装溶液A成分一的塑料瓶中，混合均匀得到240mL溶液A。注意：溶液A各成分分开提供更加稳定。
2．制备 Lowry工作液：将溶液A、溶液B和溶液C按3：1：1的体积比混合得到Lowry工作液。此工作液可以室温放置2-3周，所以最好用多少配多少。如果发现溶液B或溶液C有沉淀，需37℃溶解并摇匀后再使用。
3．制备福林酚工作液：在装有10mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入90mL 去离子水，摇晃混匀待用。此工作液在避光条件下可以放置6个月。

二、试管法
4．先用去离子水将BSA 标准(2mg/mL)稀释到50μg/mL，然后在标记的试管中加入下列成分(单位：μL)。注意：每个样品最好做三个稀释度，每个稀释度最好设置三次重复，阴性对照和标准品也最好做三次重复。

标准品(每个做三次重复，此处只列出一个)
编号	BSA 标准(50μg/mL)	水	总体积
阴性对照	0	0	200
1	0	200	200
2	25	175	200
3	50	150	200
4	100	100	200
5	150	50	200
6	200	0	200

 

样品(以1个样品、3个稀释度为例，每个稀释度三个重复，此处只列出一个)
编号	样品	总体积
1	200(稀释度1)	200
阴性对照1	200(用稀释度1稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200
2	200(稀释度2)	200
阴性对照2	200(用稀释度2稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200
3	200(稀释度3)	200
阴性对照3	200(用稀释度3稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200

5．每管中加入200μl Lowry工作液，振荡混匀后室温反应10分钟。
6．每管中加入100μl 福林酚工作液，振荡混匀后室温反应30分钟。
7．用容量为0.5mL、光径为1 cm的玻璃比色杯或聚苯*烯比色杯测定750nm的光吸收。测定时，先空白(即阴性对照)后样品，测定样品和BSA标准品时，先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净，必要时可以用*醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
8．根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线，然后根据未知样品的光吸收从标准曲线中查得其对应的浓度。

三、96微孔板法
9．同上，只是反应用96 微孔板设置，用酶标测试仪750nm 测定光吸收。

四、样品中干扰物质的去除(本产品不含相关产品，如果样品中有干扰Lowry法蛋白定量的物质(见附表)，可另购本公司的微量蛋白质沉淀试剂盒(BTN81217)去除，也可以用自备试剂按下法去除：用水将样品调到体积为200μl，加入20μl 0.15%去氧胆酸钠，混匀，室温放置10分钟。加入20μL 72%的TCA，室温放置5分钟。3000 g离心15分钟，小心去除上清。用200μl水溶解蛋白沉淀后以用于Lowry法测定。
附：常见Lowry法蛋白定量干扰物(低于所列浓度不干扰，高于所列浓度则会干扰，需要按上法去除。不能含任何浓度的DTE，DTT和硫酸胺)。

干扰物	浓度	干扰物	浓度
Acetone	10%	2-Mercaptoethanol	1mM
Aprotinin	10mg/mL	NaCl	1 M
CHAPS	0.05%	NaOH	100mM
DMF	10%	NaPi	100mM
DMSO	10%	NP40	0.02%
EDTA	1mM	PMSF	1mM
EGTA	1mM	SDS	1%
Ethanol	10%	Sodium Citrate	100mM
Glucose	100mM	Sucrose	7%
Glycin	100mM	Tris	10mM
HEPES	1mM	Trition X-100	0.03%
Imidazole	25mM	Tween 20	0.05%
Methanol	10%	Urea	3M

疑难解答：
1. 该方法检测的蛋白质浓度范围1μg～50μg/ml。
2. 由于Lowry法测定的是蛋白质中酪氨酸残基，对于那些酪氨酸残基数高于或低于BSA,其测定的蛋白质含量将偏低或偏高。如果遇到该情况，需要采用BCA或Bradford法测定。
3. 阅读测定方法后化学试剂对测定方法的影响。