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- 2025年07月14日
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江西江蓝纯生物试剂有限公司
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文献和实验抗体纯化：SPA-sepharose cl-4b 亲合层析法
装柱后用0.1mol/l pH8.6磷酸缓冲液平衡。标本可用硫酸铵粗提物，先10000g离心除去杂质，必要时用0.22μm滤膜过滤，上样前用1mol/l pH9.0 tris-HCl 液调整标本液pH至8.6或对平衡液透析过夜。↓加样，一般按25～30mg IgG/g湿胶比例加样，室温作用15min，用0.1mol/l pH8.6磷酸缓冲液充分淋洗，到淋洗液OD值为↓用不同pH的枸橼酸洗脱液洗脱，流速20ml/h。如纯化小鼠IgG1一般用pH5.5；纯IgG2a用pH4.0 ；纯化IgG2b用pH
利用SPA-sepharose cl-4b 亲合层析法分离纯化IgG抗体
缓冲液平衡。 3.标本可用硫酸铵粗提物，先10000g离心除去杂质，必要时用0.22μm滤膜过滤，上样前用1mol/l pH9.0 tris-HCl 液调整标本液pH至8.6或对平衡液透析过夜。 4.加样，一般按25～30mg IgG/g湿胶比例加样，室温作用15min，用0.1mol/l pH8.6磷酸缓冲液充分淋洗，到淋洗液OD值为 5.用不同pH的枸橼酸洗脱液洗脱，流速20ml/h。如纯化小鼠IgG1一般用pH5.5;纯IgG2a用pH4.0 ;纯化IgG2b用pH
，则需要V0+Vi体积的洗脱液，才能将它们由一端洗脱到另一端。中等分子(分子大小在上述两种极限之间)所需洗脱液体积介于两者之间，Ve=V0+KdVi(0 Kd为分配系数，它表示一种物质在孔隙内的滲透程度，相当于这种物质在孔隙内所占体积和孔隙总体积的比值。 如果假定蛋白质分子近于球形，同时没有显著的水合作用，则不同大小分子 量的蛋白质，进入凝胶筛孔的程度不同，其洗脱体积决定于分子大小。当蛋白质分子量在10000～15000时，蛋白质在葡聚糖凝胶柱上层析的洗脱
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