柱式冻存血液DNA提取试剂盒

特别提示：包括柱式冻存血液DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：柱式冻存血液DNA提取试剂盒
英文名称：Frozen blood DNA column extraction kit
产品货号：BTN120720
产品规格：50次

血液DNA是重要的研究材料，但是血液DNA在常温下存放的时间很短，因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜，释放出DNA，因此从冻存血液中高效提取DNA一直是个棘手的问题。本产品就是北京我公司开发的专门用于从冻存血液中提取DNA的试剂盒。

产品特点：
1.适用于各种动物血液，包括禽类和昆虫。
2. 微量提取，每次可处理400μL 血液。
3. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb 之间。
4. DNA 纯净，OD260/OD280在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA产量一般在10μg/mL 血液。
5. 操作简单，整个过程约20分钟，室温操作，适合大规模样品处理。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	20ml
溶液C	100ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	50ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1.从-20℃或更低的冰箱中取出血液样品，室温下静置融化。
2. 将400μL 解冻的血液转移到一个1.5mL的塑料离心管中，加入400μL溶液A，充分震荡混匀。如果是禽类血液，则少加10倍，只加40μL。
3.在混合液中加入400μL溶液B和200μL 氯*(自备)，振荡1分钟。由于离心管比较满，所以需要确保管底溶液转动起来，否则只是液面振动而已。
4. 4℃12000 g离心10分钟，小心将上清转移至一新的1.5mL塑料离心管
中。注意：最好不要室温离心，如果室温离心，则离心后部分样品的中间白色层可能会很厚，只能得到很少的上清。
5. 将约0.7-0.8mL上清转移到10-15mL塑料离心管中(不要使用玻璃离心管，否则DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可)。
6. 加入2.5倍上清体积的溶液C(2mL)，立即摇晃混匀。
7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次0.7mL左右，转移后静置2-5分钟，以使DNA与膜充分结合，然后室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液，然后再加入0.7mL，重复上述操作，直到全部混合液挂柱。
8.在离心吸附柱中加入0.7mL 通用洗柱液，室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液。
9.在离心吸附柱中再加入0.3mL 通用洗柱液，室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液。
10.室温12000 g离心30秒，去尽残留液体(此步骤十分重要，不要省略，否则残留的含乙醇的通用洗柱液将抑制后续的酶反应)。
11. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管中，加入50μL DNA 洗脱液2.0，室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0在65℃预热后再使用，洗脱DNA的效果更佳。
12.室温12000 g离心30秒，离心管底部溶液即DNA溶液，可立即使用或-20℃长期保存。
13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强，如果再次用DNA 洗脱液2.0洗脱，还能洗脱下一些血液DNA。

疑难解答：
Q：保存血液样品时温度越低越好吗？
A：不是。Tegelstrom 曾经比较了分别在-70℃，-20℃，4℃保存了6个月的蛙血，发现保存温度越低，血液DNA的断裂越严重。
Q：本产品是否可以用于放量操作？
A：可以在大的离心管中进行放量操作，如每次处理5-100mL 血液，只是客户需要单独购买红细胞裂解液，并按比例增加溶液A和溶液B的用量。
Q：冷冻血液为何DNA产量很低？
A：冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和细胞核膜，红细胞裂解液处理时释放的DNA将进入上清并丢失，所以最后得到的DNA是没有被冰晶刺破的细胞的DNA。

除了柱式冻存血液DNA提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：非酶RNA清除剂2.0
货号：BTN60912
规格：1.5mL
本品为非酶法质粒RNA去除试剂，专用于从DNA溶液中去除其中的RNA污染。

产品特点：
1.高效，能去除DNA溶液中70%以上的RNA污染。
2. 经过本产品处理过的样品在硅胶膜上的吸附率比没处理过的样品更高,与柱式硅胶膜离心吸附方法兼容。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
使用前如果本产品有分层，请冰浴后振荡混匀。

1.在一干净的离心管中加入含RNA污染的DNA溶液。
2. 加入0.1倍体积的预冷的本产品，充分混匀后冰浴10分钟。
3. 65℃水浴直到溶液变浊或出现分层为止(一般需要1-5分钟)。
4.室温12000～15000×g离心2分钟(不能低温离心)，离心后上层为无色透明，下层为淡蓝色。
5. 将上清(DNA溶液)转移到新的离心管中。
6. 如果需要，可以重复步骤3～6。
7. 所得DNA(上清)可以直接使用。

使用效果：

图注：用柱式质粒DNA提取试剂盒提取质粒DNA时，在上柱前用本产品处理裂解液(+)，其余操作不变。上样量为所得DNA量的1/5。显然没经过本产品处理的(-)质粒DNA含有大量的RNA污染。

疑难解答：
Q： 本产品与百奥莱博的RNA Scavenger-1有何区别？
A：1.本产品处理过的样品不再需要醇/盐沉淀处理，而RNA Scavenger-1处理的样品还需要醇/盐沉淀去除RNA Scavenger-1；2.本产品与柱式硅胶膜纯化方法兼容，而RNA Scavenger-1 不兼容；3是本产品不但可以用于去除质粒DNA的RNA污染，还可以用于去除基因DNA的RNA污染，而RNA Scavenger-1只能用于质粒DNA样品。

名称：游离DNA样本保存管(5ml,PET)
货号：WE0397
规格：5ml×5支|5ml×50支
本保存管为PET材质，质量轻，便于运输，管壁破损机率极小，标本在运输、离心及试验过程发生泄漏的可能性极小。
cfDNA样本保存管可直接用于血样的采集与运输，并稳定其中的cfDNA(Cell-Free DNA)。产品中的保存液由EDTA抗凝剂和特殊的保护剂组成，能够有效抑制血浆中的核酸酶，并避免血液有核细胞中基因组DNA的释放。
使用cfDNA样本保存管采集血液样本之后，在6-35℃可稳定保存cfDNA长达14天，为血液样本的运输及储存提供了极大的便利。
cfDNA样本保存管中血液样本可按大多数商业化试剂盒进行cfDNA提取，提取后的cfDNA可应用于下游的检测与分析。同时，该产品也能够用于血液有核细胞中的基因组DNA的保存。


名称：酵母基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附)
货号：ALH152
规格：50次
本试剂盒采用DNA吸附柱和独特的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份：
缓冲液YB————————————20ml
结合液CB————————————11ml
漂洗液WB————————————15ml
抑制物去除液IR—————————25ml
洗脱缓冲液EB——————————15ml
Lyticase(10U/μl)———————2500U
蛋白酶K冻干粉(20mg/ml)—————20mg
吸附柱AC————————————50个
收集管(2ml)——————————50个

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的*酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 需要自备乙醇、异*醇、β-巯基乙醇。
3. 开始实验前将需要的水浴先预热到37℃和70℃备用。
4. 结合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. 用户需要自备Sorbitol buffer( 1M 山梨醇， 0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巯基乙醇)。
配制方法：在600 ml 去离子水里面溶解182.2 克山梨醇，加入200 ml 0.5M Na2EDTA (pH 8.0) ，不需要调节PH 值，定容到1L，4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。
6. 菌体浓度检测一般OD600 值为1 的时候,酿酒酵母细胞是1-2×10^7cells/ml，由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD 值变化也很大，以上仅供参考。
7. 洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水
洗脱，但应该确保批pH 大于7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在－20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

储存条件：室温，有效期12个月。

本制品别名：柱式酵母DNA提取试剂盒