荧光素酶检测试剂盒

特别提示：包括荧光素酶检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：荧光素酶检测试剂盒
产品货号：JN0184
产品规格：100T

  本试剂盒用于以虫荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶活性。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，发出生物荧光。然后通过荧光测定仪也称化学发光仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。通过荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。通常把目的基因转录的调控元件克隆在luciferase的上游或其他适当的地方，构建成报告基因质粒。转染细胞并适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。

试剂盒组成：

组份	规格（100次）	保存
报告基因细胞裂解液	60ml	4℃
荧光素酶检测试剂	10ml	4℃

产品特点：
1、报告基因在翻译完成即有活性，不需要翻译后修饰，或荧光蛋白的成熟过程；
2、在所有化学荧光系统中具有最高的灵敏度，宿主细胞中无背景荧光；
3、检测时间快，一般单个样品检测只需要几秒钟。

产品用途：细胞生物学中用于基因表达研究或与基因表达偶联的其他细胞事件，如：报告基因活性检测、信号传导、mRNA加工、蛋白质折叠、蛋白质相互作用等。

应用实例：


图例一）不同剂量的IL-8对Luciferase报告基因表达的影响。
以Luciferase为报告基因时，EC50为0.91ng/ml。灵敏度比碱性磷 酸酶做报告基因高5倍（EC50=5.16ng/ml）。


图例二）以细胞数为基准，检测荧光素酶，标准曲线如上图。测得RLU如下：

细胞数	0	5312.5	10625	21250	42500	85000	170000
RLU	151	4341	7878	20096	45600	98210	192675

注意事项：
1、样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内。
2、测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定，以减少温度对酶反应有影响。
3、建议适当分装后避光保存，避免反复冻融和长时间暴露于室温。三次以内的冻融对测定结果无明显影响。
4、样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品最好使用相同的测定时间。

储存条件：-20℃，有效期6个月。


除了荧光素酶检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：EDTA脱钙液
货号：SNM497
规格：500ml

名称：高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)
货号：RFT151
规格：20次(100μl)
本产品是5种高纯蛋白质干粉混合物，总蛋白含量为250μg。具体蛋白含量如下：

蛋白名称	分子量(kD)	蛋白来源	蛋白含量(μg)
Thyroglobμlin	669	porcine thyroid	76
Ferritin	440	equine spleen	50
Catalase	232	bovine liver	36
Lactate dehydrogenase	140	bovine heart	48
Albumin	66	bovine serum	40

分子量范围为66kD-669kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。

使用说明：
1. 取100μl非变性蛋白上样缓冲液(1×)加入到蛋白干粉混合物中，彻底混匀融化后，-20℃贮存。
2. 常温融化后，彻底混匀，上样电泳。
注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
3. 电泳结束后，染色，观察结果。
注：使用银染时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，可以适当降低Marker上样量，一般稀释50倍。

注意：
1. 本蛋白Marker不适用于变性蛋白电泳(SDS-PAGE)，因为在SDS存在下，含有多个亚单位的蛋白会不同程度解聚。
2. 在非变性条件下，蛋白的迁移与蛋白的电荷、蛋白形状以及蛋白分子量都有关。因此，在一种凝胶浓度下使用本Marker不能精确估计出目的蛋白的分子量。非变性电泳中，蛋白分子量的确定应该是在不同凝胶浓度下，确定出蛋白的Rf值，绘制出凝胶浓度对Rf的曲线从而判定蛋白的分子量。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

名称：Protein G琼脂糖凝胶柱
货号：JN0177
规格：1ml
  本品是预先用耦联G类链球菌ProteinG的琼脂糖凝胶填好的柱子，采用开放式的设计，配备统一尺寸接口，可以与针筒注射器、蠕动泵、快速蛋白液

相色谱（FPLC）及AKTA等纯化系统配套使用，通过一步纯化即可获得高纯度的IgG。本品用于IgG和Fc片段的纯化。

产品特点：
1、操作简易：柱体已装好层析介质，可直接用于蛋白纯化
2、结合能力强：纯化介质的结合能力可达10mgGST融合蛋白/ml介质
3、特异性好：去除了白蛋白和细胞表面结合域，减少了非特异性结合

技术实例：

百奥莱博Protein G预装柱结合能力。
Lane1: Protein Marker(PJN0066)
Lane2: Loading Sample
Lane3: Flow-through
Lane4: Elution(reduced)
Lane5: Elution(non-reducing)

名称：DAB法显色试剂盒(小鼠IgG)
货号：QN1162
规格：1盒
本试剂盒主要用于western blotting的DAB显色，含有抗小鼠IgG酶标二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。

试剂盒组分：
封闭试剂————————————30g
10倍浓缩抗体稀释液———————50ml
酶标二抗————————————0.5ml，效价1:500～3000
20倍DAB浓缩显色液-———————5mlA+5mlB。

常规电泳转膜后:
1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2) 按5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。
3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml 双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4) 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。
6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按10ml 抗体稀释液加入10ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次10min。
8) 配制DAB 显色：根据用量，取TBS-T 4ml，加入DAB 显色液A、DAB 显色液B 各200ul，混匀，加在膜正面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。

注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。
2. western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。
3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。
4. 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程， 如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。
5. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml 的双蒸水溶解，用盐酸调PH 到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

储存条件：-20℃避光，有效期一年。