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- 百奥莱博
- SYA096-HOS
- 北京
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
119
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
阴凉干燥
- 规格：
48次/盒
特别提示：包括沙门菌/志贺菌双重荧光PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：沙门菌/志贺菌双重荧光PCR检测试剂盒
产品货号：SYA096
产品规格：48次/盒
除了沙门菌/志贺菌双重荧光PCR检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
名称：霍乱弧菌单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA006
规格：48次/盒
名称：产毒副溶血弧菌单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA009
规格：48次/盒
名称：炭疽杆菌单重荧光PCR检测试剂盒(分别有检测Capa/Rob/PAG的试剂盒)
货号：SYA014
规格：48次/盒
一、简介
本试剂盒用三对炭疽杆菌特异性引物(Cap/robB/pagA)，各结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对炭疽杆菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途
该试剂盒适用于检测皮肤水泡液、咽拭子、可疑食物等样本中的炭疽杆菌特异性核酸序列(pX01质粒-pagA基因；pX02质粒-cap基因；染色体-rpoB基因)进行扩增，用于炭疽杆菌感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成(48T)
组份 数量 规格
反应液(qPCR MIX) 1管 480μL/管
pagA荧光引物和探针 1管 240μL/管
Cap荧光引物和探针 1管 240μL/管
rpoB荧光引物和探针 1管 240μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
皮肤炭疽，取水泡液1mL；肺炭疽，采集咽拭子标本，放入标本采集管中；肠炭疽，取粪便1g。
6.2 样本前处理：
固体样本：手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中，液体样本：直接取上100μL于1.5mL灭菌离心管中。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入50uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(qPCR MIX)、引物及探针，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 10µL N×10µL
Cap或robB或pagA引物及探针 5µL N×5µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(PTC)：均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明核酸阴性。
(3) 如果Ct值>35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵 不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。 表6-4-1 常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类 单糖 四碳糖：赤藓糖 , 五碳糖：核糖 核酮糖 木糖 阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖 果糖 半乳糖 甘露糖 双糖 蔗糖（葡萄糖＋果糖） 乳糖
活组织，分别做尿素酶试验（兰州军医学校生产试剂盒），细菌培养及Warthin－Starry银染检查（由本科专职病理医师完成）。另取胃窦粘膜活组织村本一块，置500μlTE（10mmol/LTris.HCI.1mmol/LEDTA）（pH8.0）缓冲液中研碎，加10％SD30μl蛋白酶K（20mg/ml）3ml，55℃消化1h，以等体积苯酚―氯仿提取模板DNA用于PCR检测，标本处理程中以缓冲液做阴性对照。 统计学处理采用配对四格表资料的X 2 检验
核细胞。用DMEM培养液悬浮，进行台盼兰排斥实验鉴定活力，细胞计数，调整细胞数总量约为1×107个，抽提核结合蛋白或总RNA。上述过程均在4℃条件下进行。 核蛋白提取方法（该方法可才用active motif 公司提供的核蛋白提取试剂盒进行，深圳晶美公司有售，注意细胞数量要达到10的7次方，低温、蛋白酶抑制、蛋白定量等） 取细胞悬液1ml（细胞数总量约为1×107个）高速（10,000~12,000g）离心5min，吸弃上清，用Buffer A [HEPES 10mM (在4C时pH7.9 )、氯
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