犬副流感病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒(探针法)

特别提示：包括犬副流感病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒(探针法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：犬副流感病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒(探针法)
英文名称：Canine Parainfluenza Virus qRT-PCR Kit （Probe Method）
产品货号：BTN11-180301
产品规格：50次

犬副流感病毒（CPIV）可以引起犬副流感，这是犬的主要的呼吸道传染病。临床表现发热、咳嗽、流涕等症状。病理变化以卡他性鼻炎和支气管炎为特征。研究表明，犬副流感病毒也可引起急性脑髓炎和脑内积水，临床表现后躯麻癖和运动失调等症状。传统诊断方法主要有病毒的分离鉴定、免疫荧光抗体试验、免疫电镜观察和ELISA 等方法。但这些方法操作过程繁琐、操作难度大，所需要时间较长，专一性不强因此建立一种快速、高灵敏度的诊断方法对防治犬副流感病毒是十分必要的。本产品就是针对这一需求开发的实时定量RT-PCR 产品。

产品特点：
1. 灵敏度高，分析灵敏度可以达到50 拷贝/uL，远高于常规方法，也比常规的RT-PCR 检测高100 倍。
2. 特异性高，根据CPIV的保守区设计引物，不会误检其他猪的病原性病毒
3. 一管封闭式，避免了RT-PCR 产物对后续RT-PCR的污染。
4. 线性范围广，在10-107 拷贝/uL的靶分子浓度范围内均呈线性。
5. 简单快捷，只需要2 小时即可得到实验结果。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
即用型荧光RT-PCR Mix	BTN101219	750μl
CPIV 专一性引物对（25uM each）	Yw14141415	100μl
CPIV 阳性对照片段（10E10 拷贝/uL）	Yw14161417	10μl
CPIV 专用探针（5.4nM，5FAM-3HBQ1）	Yw1418	25μl
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

除了犬副流感病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒(探针法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：季节性H3流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA149
规格：48次/盒

名称：乙型流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA163
规格：48次/盒

名称：H1/H3型流感病毒双重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA167
规格：48次/盒

名称：H7/H9型流感病毒双重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA168
规格：48次/盒

名称：轮状病毒A型单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA197
规格：48次/盒

名称：手足口病肠道病毒(EV71)单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA211
规格：48次/盒

名称：诺如病毒G1/ G2分型双重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA215
规格：48次/盒

名称：登革热病毒Ⅰ型单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA225
规格：48次/盒

名称：裂谷热病毒单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA233
规格：48次/盒

名称：新布尼亚病毒单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA249
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对新布尼亚病毒特异性引物，结合特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对新布尼亚病毒 RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中新布尼亚病毒的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于新布尼亚病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
新布尼亚荧光qRT-PCR反应液 1管 960μL/管
酶混合物 1管 48μL/管
阴性对照 1管 250μL/管
阳性对照 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为12个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的处理与RNA提取
6.1 样品前处理
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.2g于研磨器中研磨，加入1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL 灭菌离心管中；液体样品，直接取100μL提取。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液、RT-PCR Reaction Buffer、酶混合物，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光SFTSV反应液 20µL N×20µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 21µL N×21µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照/阳性对照4μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 42℃ for 20 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 94℃ for 15 sec
55℃ for 30 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值<35的样本为阳性，表明新布尼亚病毒核酸阳性。
（2） Ct值显示为无或Ct值≥38的样本为阴性样本，表明新布尼亚病毒核酸阴性。
（3） 如果35≤Ct值<38，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行新布尼亚病毒 qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明新布尼亚病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。