pCMV-SPORT6-PLEK2（第686位碱基A缺失）人

基因组编辑技术应用于作物遗传改良的进展（上篇）

-homologousendjoining，NHEJ)2 种修复途径 (图 1)。当存在同源序列供体 DNA 时，以 HDR 方式的修复能够产生精确的定点替换或插入;而没有供体 DNA 时，细胞则通过 NHEJ 途径修复。因 NHEJ 方式的修复往往不够精确，在 DNA 链断裂位置常会产生少量核酸碱基的插入或缺失 (insertion-deletion，InDel)，从而导致基因突变。SSNs 自 2002 年出现以后，就掀起了一股席卷全球的基因组定点编辑研究热潮。尤其是 2010 年出现 TALENs 和 2013 年出现

重组DNA技术与基因工程(组图)

外源基因片段长度约10kb。将外源基因插入到MCS中，随质粒的表达而表达，增殖而扩增。外源基因插入到MCS后，β-半乳糖苷酶的活性丧失而不显兰色-白色菌落。如果不插入外源基因，则产生兰色。从而筛选阳性菌落。 （二）.λ-噬菌体(λphage) 是一种可在体外包装的细菌病毒,可高效感染大肠杆菌.λ-噬菌体DNA是线状双链DNA分子,全长约50kb,每条链各带12bp长的单链互补末端-粘末端(COS序列)。进入宿主细胞后不久，COS序列碱基配对环化。 改建后的λ噬菌体发展了多种较大型的克隆

RNAi技术专题之：体外转录合成双链RNA

选用NA（N21）或NAR（N17）YNN（R表示嘌呤，Y表示嘧啶），但在合成时，siRNA的正义链3’端需用dT—dT代替。TuscRl等建议设计的siRNA不要针对mRNA的5’和3’端非编码区，因为这些区域有丰富的调控蛋白结合位点，而UTR结合蛋白或者翻译起始复合物可能会影响siRNP（siRNA protein complex，核酸内切酶复合物）结合mRNA，从而影响siRNA干扰的效果。最后还应将候选siRNA序列在GenBank进行BLAST检索，与非同源基因具有3个或3个以上碱基相异