LAMP试剂盒(含染料)

特别提示：包括LAMP试剂盒(含染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：LAMP试剂盒(含染料)
英文名称：Loop-mediated isothermal amplification Kit(With visible light dye)
产品货号：MT0030
产品规格：50T|200T

LAMP(环介导等温扩增技术)是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。本试剂盒含有可见光染料，阳性扩增样品的颜色为天蓝色，阴性扩增为紫罗兰色。购买本试剂盒，我们可以免费为客户设计引物，需要设计引物的请发Email咨询。

产品特点：
1．检测方便：变色反应，颜色变化明显，肉眼即可观察。
2．操作简单：一步反应30分钟即可完成。
3．特异性高：六条特异性引物，保证了产物的特异性和检测的可靠性。
4．仪器简单：只需维持恒温的水浴锅。
5．灵敏度高：能从极低拷贝中扩增靶基因。
6．应用广泛：广泛适用于微生物致病菌检测和疫病检测。

产品组成：

组分	50T	200T
10×可见光染料	150μl	1ml
10×LAMP Buffer	1ml	1ml
100 mM MgSO4	500μl	500μl
10 mM dNTP Mixture	500μl	1ml
Bst DNA Polymerase 2.0	50μl	200μl

注意：10×LAMP Buffer中的Mg2+浓度为60 mM。

保存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期3年。

反应实例：

应用本试剂盒和6条引物扩增HHV-6 DNA，产物分别可见光染料显色观察和电泳法检测

使用方法：
1．按以下组分配置反应混合液：

加入物	加入量
10×LAMP Buffer	2.5μl
10×可见光染料	2.5μl
10mM dNTP Mixture	2μl
模板 DNA	Xμl
*10×LAMP Primer Mix	2.5μl
Bst DNA Polymerase 2.0	1μl
ddH2O	Up to 25μl

*10×LAMP Primer Mix：FIP/BIP 16μM each，Loop F/R 8μM each，F3/B3 2μM each
2．反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，65℃ 30分钟。

注意事项：
1．为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作最好在不同区域中进行）。
2．实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1ng～100ng），可先进行预实验确定模板量。
3．10×LAMP Buffer中含有60 mM MgSO4，反应体系中Mg2+终浓度为6 mM。通常无需添加即可，必要情况下可提高到10～16mM。
4．各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。
5．实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸头。


除了LAMP试剂盒(含染料),，我公司还供应以下相关产品：



名称：25mM氯化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)
货号：BTN130307
规格：5mL
本产品为专门用于易错PCR的MnCl2水溶液，浓度为25mM，可用于调节MnCl2的最佳浓度。由于Mg2+在PCR过程中可以稳定非互补的碱基对，Mn2+能够降低聚合酶对模板的特异性，因而调整两种离子的浓度，可获得不同突变频率的多样性文库。

氯化锰分子量为125.8，CAS号为7773-01-5，水合氯化锰外观为玫瑰色单斜晶体；无水氯化锰外观为桃红色结晶。密度为2.977g/cm3。熔点是650℃。在高于熔点温度下升华。沸点1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：dGTP溶液(100mM)
货号：YT387
规格：250μl
dGTP即2’-deoxyguanosine 5’-triphosphate，中文名为脱氧鸟苷三磷酸，常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反应、DNA测序、DNA标记等各种常规分子生物学反应。

分子式：C10H13N5O13P3Na3
分子量：573.2(酸形式的分子量为507.2)
最大吸收波长：253nm。

本dGTP溶液用超纯水配制，并用高纯度NaOH溶液调节pH值至7.0，浓度为100mM，即100mmol/L。
本dGTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。
本dGTP溶液经测试，可以直接用于PCR等各种常规分子生物学反应。

储存条件：-20℃。

名称：2×Pfu MasterMix(含染料)
货号：WE0108
规格：5ml
  本品为Pfu DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Pfu DNA Polymerase具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具备纠错能力，是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。*创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。本产品所含的Pfu DNA聚合酶具有错配率低，耐高温的特点，适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等反应。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×Pfu MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×Pfu MasterMix含有Pfu DNA Polymerase, 3 mM MgCl2和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，活性无明显改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Pfu MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物为平端不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。