丝状真菌胞浆蛋白提取试剂盒

特别提示：包括丝状真菌胞浆蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：丝状真菌胞浆蛋白提取试剂盒
英文名称：Filamentous fungal Cytoplasmic Protein Extraction Kit
产品货号：HR8093
产品规格：50T/100T

丝状真菌胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种丝状真菌样本中提取胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒(相关产品HR0165)。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
【注】：
●蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
●蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得zuì佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便。
●含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
●蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● 移液器●冰箱●冰盒
试剂：
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1×))(phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
耗材：
●离心管● 吸头

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
● 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● 下游实验如果是进行特定蛋白酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

1．提取液准备：
每500μl提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
●以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2．取100-300mg 真菌组织样本，用PBS 洗一次。离心收集菌体沉淀。
3．在菌体沉淀中加入500μl提取液A，用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
【注】：
● 如果有条件，将菌体置于研钵中用液氮充分研磨，研磨后加入500μl冷的提取液A。
● 没有液氮研磨条件可以在菌体中直接加入500μl提取液A 直接置冰上研磨。
4．将匀浆液在500g离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
5．在上清中加入100μl提取液B，充分混匀。
6．将提取液在2-8℃振荡30-40分钟。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
7．将提取液在4℃下12000-16000×g条件下离心10分钟，弃沉淀。
8．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
9．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A试剂B的处理时间即可。
zuì好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

除了丝状真菌胞浆蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：一步法Western专用封闭液
货号：WE0296
规格：100ml
  Western Blot实验中，为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附，导致实验结果不清晰，通常在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。本产品以奶粉为基础，采用独特配方，专用于百奥莱博一步法WB检测中的封闭步骤，可快速高效地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭，操作方便快捷。另外，本产品特别添加了蛋白稳定剂，可保证每次实验封闭效果稳定可靠。

注意事项：
1、每次使用时，必须保证封闭液将印迹膜完全浸没，以免影响封闭效果。
2、本产品含有防腐剂，操作时请佩戴手套进行防护。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：

1、本产品无需稀释，开盖即用。
2、目的蛋白转移完毕后，将印迹膜放入容器中，加入适量One Step Western Blocking Buffer。
3、室温孵育5分钟。
4、封闭结束后弃去封闭液，进行一步法Western Blot后续操作。

储存条件：2～8℃

名称：10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)
货号：SY0320
规格：100ml
本品属于裂解强度居中的RIPA裂解液，裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。本品为10倍浓缩液，使用时需稀释成1×工作液。

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

注意事项
1）本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂，使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

(一) 细胞样品
1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
【注】：如需加入PMSF，请在使用前数分钟内加入，使其zuì终浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105～1×106个细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：
1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
【注】：如需加入PMSF，请在使用前数分钟内加入，使其zuì终浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。