敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅰ（POD）

核酸的分子杂交技术及其应用

杂交技术的几个主要过程及其应用进行介绍。2　核酸探针的制备 核酸分子杂交的灵敏性主要依赖杂交探针的放射性比活度。比活度高就可提高反应的灵敏性，减少待测样品的用量。目前一般所用的是体外标记，这里介绍几种最常用的方法：2.1　DNA 的切口平移 双链DNA 分子的一条链有切口时，大肠杆菌DNA 聚合酶Ⅰ可把核苷酸残基加到切口处的3’端，同时由于此酶具有5’→3’外切核酸酶活性，它还可从5’端除去核苷酸。这样5’端核苷酸的去除与3’端核苷酸的加入同时进行，导致切口沿着DNA 链移动，称切口

原位杂交组织化学常用试剂及处理

一、杂交前准备 　　（一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 　　DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理水（蒸馏水等）中，经猛烈振摇后，于室温静止数小时，然后高压灭菌，以除去降解DEPC（DEPC分解为CO2 和乙醇）。有些试剂可直接加入DEPC，终浓度一般为0.1%～

原位杂交实验要求及步骤

甲醛。（见图2-7）。取材，置于4%多聚甲醛中后固定4hr。以0.1M PBS浸泡冲洗4-5次（换液：1次/hr）。将组织块入30%蔗糖/0.1M PBS液（4℃），1-2天后冰冻切片，将切片裱贴于原位杂交专用玻片上，切片厚度为15-20μm。 （二）探针制备与检测（定量）： 1. 随机引物制备cDNA核酸探针以DIG DNA 标记检测试剂盒为例： （1）探针制备： ①模板DNA(0.5-3 μg) 15 μl，100℃变性10 min，冰浴5 min。 ②在冰浴中加