微藻细胞核提取试剂盒

特别提示：包括微藻细胞核提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：微藻细胞核提取试剂盒
英文名称：Microalgae cell nuclear extraction kit
产品货号：HR8193
产品规格：50T/100T

微藻细胞核提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种真核类微藻中提取细胞核。此试剂盒提供了一个系统，维持核组分是分开和完整的。优化的试剂配方和程序可以快速分离胞核，而绝少交叉污染。
本试剂盒适用于常见的各种绿藻、金藻、硅藻、甲藻、螺旋藻等单细胞、多细胞、丝状体、多核体等形态真核类藻类。配合适当方法调整，也可以用于蓝藻等原核藻类的细胞器提取。
本试剂盒提取的胞核组分仍保持其生化功能，适合各种下游分析如转录活性，RNA 拼接，gel－shift分析，报告分析，酶活性分析和WB等。

储存条件：提取液A和C 2-8℃保存；提取液B-20℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
试剂盒以外自备试剂耗材和仪器：
● PBS ● 吸头、离心管 ● 移液器 ●冰盒 ●离心机 ● 涡旋振荡器 ●冰箱

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

1．提取液制备：
每1000μl冷的提取液A中加入10μl提取液B，混匀后置冰上备用。
【注】：
① 根据需要处理的样品数量准备提取液，提取液B 不可以一次全部加入提取液A。
2．取培养好的微藻样品，1000g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3．用PBS 洗涤微藻细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．用提取液A重悬微藻细胞。每100-300μl细胞压积中加入1ml 提取液A。
5．将微藻细胞悬液置振荡器上37℃或室温振荡1-3小时。
【注】：
① 不同类型的微藻需要处理的时间差异较大。
6．离心力1000g离心5分钟，收集细胞，将上清移入另一离心管保存备用。
7．用PBS 洗涤细胞一次，1000g离心5分钟，收集细胞，洗涤后尽可能吸干上清。
8．在细胞沉淀中加入1ml试剂C重悬细胞，混匀。
9．将细胞悬液置振荡器上振荡30分钟。
10．离心力2000g离心5分钟，弃上清，收集沉淀。
11．沉淀即为微藻细胞核。将上述微藻细胞核沉淀用适当缓冲液重悬后2-8℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

除了微藻细胞核提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：Percoll
货号：BTN131134
规格：250mL
Percoll是一种常用的低粘度的密度梯度介质，由直径在15-30nm的硅胶颗粒组成，颗粒外包被了聚*烯吡*烷酮(PVP)，为化学惰性，不会影响细胞的活性。

产品特点：
1．Percoll渗透压很低(<20mosm/kg H2O)，粘度也很小，可形成高达1.3g／ml 密度。
2．采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。
3．离心后能形成1-1.3g/mL的密度梯度，可用于分离各种悬浮的细胞、线粒体、叶绿体和病毒(可小到70S)。
4．由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
5．Percoll溶液高压灭菌，必须进行不添加盐或蔗糖。盐的存在会引起percoll糊化，蔗糖的存在会引起焦糖化。

储存条件：常温运输和保存，有效期五年(未开封状态)。

使用方法：
1．不同浓度(密度)Percoll溶液的制备：先用9 份Percoll与1份 8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。

Percoll浓度(％)	70	60	50	40	30	20
比重g/ml	1.090	1.077	1.067	1.056	1.043	1.031

2．不连续密度梯度Percoll层的制备：先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll 比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
3．装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
4．离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll 之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。
5．取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll 层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

分离纯化细胞举例
1．富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五种不同密度的Percoll,如用10ml 试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2～1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×10８悬于１ml培基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK 杀伤活性的LGL细胞位于42.5％与45％Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
2．纯化淋巴母细胞和除去死细胞：分别叠加50％和30％Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者)，按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞；两层Percoll之间为淋巴母细胞，纯度和回收率在80％以上，位于30％Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。