Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）

特别提示：包括Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）
英文名称：Afu uracil -DNA glycosylase (UDG)
产品货号：SV1102
产品规格：1KU|200U

特性:
热稳定
从双链或单链 DNA 上切下尿嘧啶
概述:
Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（Afu UDG）是 E.coli 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）热稳定的同源蛋白，来源于闪烁古生球菌（Archaeoglobus fulgidus）。该酶从含尿嘧啶的 DNA 上催化释放尿嘧啶，能有效地水解双链和单链 DNA 上的尿嘧啶。
来源:
克隆自闪烁古生球菌（Archaeoglobus fulgidus）UDG 基因的 E. coli 菌株。
反应条件:
1X ThermoPol II（不含 Mg2+）反应缓冲液
[10 mM KCl，10 mM (NH4)2SO4，20 mM Tris-HCl，0.1% Triton X-100（pH 8.8 @ 25℃）]，65℃ 温育。
质保声明:
Afu UDG 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义:
1 单位指每分钟从含尿嘧啶双链 DNA 上催化释放 60 pmol 尿嘧啶所需要的酶量。通过检测 65℃ 30 分钟内，从 50 μl 含 0.2 μg DNA（104～105 cpm/μg）的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。
浓度:
2,000 units/ml。
注意事项:
Afu UDG 在 150 mM NaCl 存在条件下，仍有 50% 的活性。Afu UDG 煮沸 30 分钟之后在标准反应条件下仅存少于 1% 的活性。在标准反应条件下，尿嘧啶糖苷酶抑制剂（UGI）不能抑制 Afu UDG 的活性。

除了Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）,，我公司还供应以下相关产品：



名称：ATP硫酸化酶
货号：BTN130660
规格：10U
ATP硫酸化酶催化硫酸根的活化，通过转移硫酸根至ATP的腺嘌呤单磷酸基团，形成腺苷-5´-磷酸硫酸(APS)和焦磷酸。这个反应是可逆的：ATP硫酸化酶也可以催化APS和焦磷酸合成ATP，后者可用于焦磷酸高通量DNA测序。

活性定义：1单位指40μL反应体系中，30℃条件下1分钟催化1μmol APS和焦磷酸转化成ATP所需的酶量。

活性检测条件：115mM Tris-HCl(pH8.0)，0.58mM β-NADP，2.4mM Mg acetate，34mM D-葡萄糖，0.3mM APS，3.4mM 焦磷酸，0.75units/mL己糖激酶和0.5 units/mL葡萄糖6-磷酸脱氢酶。

Buffer成分：10mM Tris-HCl(pH7.5)，50mM NaCl，0.1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

名称：末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)
货号：YT512
规格：500U
本酶是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3"羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。

用途：寡核苷酸或DNA 3"羟基末端标记；DNA末端加尾(DNA tailing)；5"-RACE；合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。
活性定义：37℃60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3"羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。
酶储存溶液：100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v)glycerol 。
Reaction Buffer(5X)：0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。
失活或抑制：70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. DNA 3’末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待标记DNA————————————————————10 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X) ——————————————10µl
[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol (3000Ci/mmol)————1.85 MBq (50µCi)
TdT (20U/µl) ——————————————————2µl
补充无核酸酶的去离子水 —————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明：标记的效率和3’羟基末端的类型有关，3’突出末端的标记效率要显著高于3’缩进末端或平末端的标记效率。

2. DNA末端加尾(DNA Tailing)：
a. 参考下表格设置反应体系：
DNA片段 ————————————————————1 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X)——————————————4µl
dATP or dTTP——————————————————130pmol
或 dGTP or dCTP (四种中通常只需加入一种)————60pmol
TdT (20U/µl)——————————————————1.5µl
补充无核酸酶的去离子水—————————————至20µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明：在上述反应条件下，每个3’羟基末端可以加上100-130个dA或dT，或20-30个dC或dG。

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。