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Annexin V-FITC/
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上海臻诺生物科技有限公司
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Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit价格优惠 品质保证 订购热线:18221746381 (VX) QQ:2364307136
Cat number:KGA105-KGA108Store at 2-8℃ for 12 months,protected from lightFor Research Use Only(科研专用)一、 试剂盒说明在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca 2+ 依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素 FITC 标记,以标记了的 Annexin V 作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V 与 PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。二、 试剂盒组份组份Cat: KGA105(10 assays)Cat: KGA106(20 assays)Cat: KGA107(50 assays)Cat: KGA108(100 assays)储存条件AnnexinV-FITC 50 μL 100 μL 250μL 500 μL 2-8℃,避光Propidium Iodide 50 μL 100 μL 250μL 500 μL 2-8℃,避光Binding Buffer 5.0 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 2-8℃三、试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS、不含 EDTA 的胰酶消化液四、使用注意事项1. 微量试剂取用前请离心集液。2. Annexin V-FITC,Propidium Iodide (PI)避光保存及使用。3. Propidium Iodide(PI)有毒,操作时要戴手套。4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于 1×10 5 ,不推荐用于检测组织样本。5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含 EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含 2%BSA 的 PBS 中,防止进一步的损伤。6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。、 五、 操作方法1. 悬浮细胞离心(2000rpm 离心 5min)收集;贴壁细胞用不含 EDTA的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不易过长,否则容易引起假阳性);2. 用 PBS 洗涤细胞二次(2000rpm 离心 5min)收集 1~5×105 细胞;3. 加入 500μL 的 Binding Buffer 悬浮细胞;4. 加入 5μLAnnexin V-FITC 混匀后,加入 5 μL Propidium Iodide,混匀;5. 室温、避光、反应 5~15min;6. 请在 1 hour 内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。A .荧光显微镜观察1) 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;2) 对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;1 将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;2 用 PBS 洗涤细胞两次;3 在 500μL 的 Binding Buffer 中加入 5μLAnnexin V-FITC,5 μL Propidium Iodide,混匀;4 将上述溶液滴加于盖玻片表面,使盖玻片表面均匀覆盖;5 避光、室温反应 5 min。6 将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下、双色滤光片(FITC 和罗丹明)观察。Annexin V-FITC 荧光信号呈绿色,PI 荧光信号呈红色。B .流式细胞仪分析1) 用流式细胞仪检测,激发波长 Ex=488 nm; 发射波长 Em=530 nm。2) Annexin V-FITC 的绿色荧光通过 FITC 通道(FL1)检测;PI 红色荧光(流式 Ex=488nm,Em≥630nm)通过 FL2 或 FL3 通道检测,建议使用 FL3。3) 荧光补偿调节:使用经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
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