Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI  细胞凋亡检测试剂盒
Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
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 Cat number：KGA105-KGA108
Store at 2-8℃ for 12 months，protected from light
For Research Use Only(科研专用)
一、 试剂盒说明
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂
酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca 2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与磷
脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 Annexin V
被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素 FITC 标记，以标记了的 Annexin V 作为荧
光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死
细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V 与 PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细
胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
二、 试剂盒组份
组份
Cat: KGA105
(10 assays)
Cat: KGA106
(20 assays)
Cat: KGA107
(50 assays)
Cat: KGA108
(100 assays)
储存条件
AnnexinV-FITC 50 μL 100 μL 250μL 500 μL 2-8℃,避光
Propidium Iodide 50 μL 100 μL 250μL 500 μL 2-8℃,避光
Binding Buffer 5.0 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 2-8℃
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器
1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含 EDTA 的胰酶消化液
四、使用注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-FITC，Propidium Iodide （PI）避光保存及使用。
3. Propidium Iodide（PI）有毒，操作时要戴手套。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于 1×10 5 ，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含 EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而
用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含 2%BSA 的 PBS 中，防止
进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每
次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
、 五、  操作方法
1. 悬浮细胞离心（2000rpm 离心 5min）收集；贴壁细胞用不含 EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不
易过长，否则容易引起假阳性）；
2. 用 PBS 洗涤细胞二次（2000rpm 离心 5min）收集 1~5×105 细胞；
3. 加入 500μL 的 Binding Buffer 悬浮细胞；
4. 加入 5μLAnnexin V-FITC 混匀后，加入 5 μL Propidium Iodide，混匀；
5. 室温、避光、反应 5～15min；
6. 请在 1 hour 内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A ．荧光显微镜观察
1) 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2) 对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
1 将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
2 用 PBS 洗涤细胞两次；
3 在 500μL 的 Binding Buffer 中加入 5μLAnnexin V-FITC，5 μL Propidium Iodide，混匀；
4 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使盖玻片表面均匀覆盖；
5 避光、室温反应 5 min。
6 将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下、双色滤光片（FITC 和罗丹明）观察。Annexin V-FITC 荧
光信号呈绿色，PI 荧光信号呈红色。
B ．流式细胞仪分析
1) 用流式细胞仪检测，激发波长 Ex=488 nm; 发射波长 Em=530 nm。
2) Annexin V-FITC 的绿色荧光通过 FITC 通道（FL1）检测；PI 红色荧光（流式 Ex=488nm,Em≥630nm）通
过 FL2 或 FL3 通道检测，建议使用 FL3。
3) 荧光补偿调节：使用经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的
位置。