GRE荧光素酶报告基因质粒(糖皮质激素响应元件)

特别提示：包括GRE荧光素酶报告基因质粒(糖皮质激素响应元件)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：GRE荧光素酶报告基因质粒(糖皮质激素响应元件)
英文名称：GRE-luc Reporter gene plasmid
产品货号：YT448
产品规格：1μg

GRE报告基因质粒是用于检测糖皮质激素响应元件(glucocorticoid response element, GRE)转录激活水平的报告基因质粒。GRE质粒是以pGL6质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个GRE位点，可以高灵敏度地检测GRE的激活水平，检测糖皮质激素介导的信号途径(glucocorticoid-mediated signaling pathway)的激活水平。

pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

GRE质粒的主要信息如下：
 

Base pairs	5615
Glucocorticoid response element (GRE)	26-70
luc2 reporter gene	116-1768
SV40 late poly(A) signal	1803-2024
SV40 early enhancer/promoter	2072-2490
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor) coding region	2515-3309
Synthetic poly(A) signal	3334-3382
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3449-3468
ColE1-derived plasmid replication origin	3706
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	4497-5357
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5462-5615
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5564-5583

GRE质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. GRE可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。
3. 糖皮质激素可以激活GRE，可以用作GRE报告基因检测时的阳性对照。

储存条件：-20℃。

除了GRE荧光素酶报告基因质粒(糖皮质激素响应元件),，我公司还供应以下相关产品：



名称：λDNA(不含N6-甲基腺嘌呤)
货号：BTN90407B
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

名称：新生霉素溶液
货号：BTN120695
规格：5mL
本产品是浓度为50mg/mL的新生霉素溶液。新生霉素(Albamycin、Cardelmycin、Cathomycin、Cathomycine)，分子式为：C31H35N2NaO11，分子量是：634.61，CAS号：1476-53-5，抗菌谱和青霉素相似，主要用于耐药性金葡菌引起的感染，如肺炎、败血症等，对严重感染疗效较差。通过抑制细胞增殖、抑制DNA合成、影响拓扑异构酶ⅡDNA交联复合物的形成及延误细胞周期进展发挥抗癌作用。

结构式：


储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

名称：无缝连接克隆试剂盒
货号：ALH338
规格：10次
本试剂盒不依赖于T4连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，而直接用同源重组的方法，采用特殊的重组酶可以将任意方法线性化后的载体和与其两端具有 15-25bp 重叠区域的PCR片段定向重组，可以快速实现 1-5 个片段的高效无缝克隆。

试剂盒特点：
1.30分钟可以将一个或者多个长、短PCR扩增片段（平端、A端均可）插入载体。
2.不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制，可以在任意位点进行克隆。
3.无缝克隆，插入点不会引入不需要的碱基序列。
4.高效、准确，阳性率＞95% 。

储存条件：-20℃。

本制品别名：通用型连接克隆试剂盒

名称：pUC19 Vector 克隆载体
货号：SY0297
规格：1μg
pUC19 Vector，一种通用型克隆载体，大小为2686bp。主要用于DNA的克隆和测序，载体上带有lacZα片段，可用于蓝白斑筛选。本品浓度100ng/μl，保存于1×TE缓冲液（10 mM Tris-HCl, pH 8.0; 1 mM EDTA）中。

质粒图谱


pUC19 MCS


储存条件：-20℃，有效期12个月。

名称：DH5α化学感受态细胞
货号：MQ0001
规格：20×100μl/100×100μl
DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。
DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培 12-14小时才能看见克隆；如需加快试验速度，请选用TG1，Mach1-T1，XL10-Gold等生长速度快的感受态细胞。
DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率约1×109cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F)U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+)supE44λ-thi-1 gyrA96 relA1 phoA
操作说明：
1.DH5α感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中)，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少17h。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

名称：EHA101电击感受态细胞
货号：MQ0062
规格：10×50μl/50×50μl
EHA101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA101(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：kan，赋予EHA101菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。EHA101电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性，size:11876bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA；经pK7WGF2-ZH质粒(size:40 kd)检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
C58(rif r)Ti pEHA105(pTiBo542DT-DNA)Succinamopine
操作说明：
1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5 μg质粒DNA(质粒体积不大于6μl，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解)，用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V(此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
4.6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入双元载体抗生素，20 μg/ml rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50 μg/ml rif则需要28℃培养72-90小时)。
注意事项：
1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2.混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4.利福平浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。