产品简介:
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,如Triton、SDS、NP-40等,Western及IP细胞裂解液是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞,并获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X-100, 低浓度sodium pyrophosphate等组成,不含蛋白酶、磷酸酶抑制剂,并维持原有的蛋白间相互作用。
用Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors)得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。
注意事项:
去除贴壁细胞的培养液时,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
溶解Leagene Cell lysis buffer for Western and IP时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。