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文献和实验肿瘤细胞侵袭试验(Tumour Invasion Assay)
一、原理Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分,含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖,铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上,能在DMEM培养基中重建形成膜结构,这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。滤膜孔径一般为8um,而且膜孔都被Matrigel覆盖,细胞不能自由穿过,必须分泌水解酶,并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜,这与体内情况较为相似。铺有Martrigel的滤膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之间,铺有Martrigel面朝
的研究。 下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择,当然不同细胞其体积不同,具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验: (1)共培养体系: 小于3.0 um孔径条件下,细胞不会迁徙通过,因此,若研究不涉及细胞运动能力,不需要细胞穿过聚碳酸酯膜,则应选择3.0μm以下孔径。常用0.4、3.0μm。我们实验室用的是0.4μm。 将细胞A种于上室,细胞B种于下室,可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。(2).趋化性实验
BSS)平衡盐溶液溶解水解乳蛋白(一般为5‰浓度),即成乳汉(欧)液,再与化学合成培养基(一般为MEM)按比例混合使用(如1:1)。水解乳蛋白为乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物,含有丰富的氨基酸。既可用于细菌微生物培养,又可用于动物细胞培养。细胞培养中一般为0.5%水解乳蛋白(经平衡盐溶解)与合成培养基(如MEM)按1:1混合使用。目前在生产中主要用于地鼠肾细胞等细胞的培养和维持。但是水解乳蛋白的使用也给生物制品的生产带来一定的风险。首先由于水解乳蛋白来源于动物,有可能携带传染源,包括病毒和有毒
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