Hoechst33342染色试剂盒

特别提示：包括Hoechst33342染色试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Hoechst33342染色试剂盒
产品货号：HR0455
产品规格：100T

Hoechst33342染色试剂盒可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。Hoechst33342 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342 比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA 结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342 排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33342和双链DNA 结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。
本Hoechst 33342染色试剂盒可直接用于活细胞或组织的细胞核染色，也可用于固定细胞或组织的细胞核染色。

储存条件：HO33342液-20℃避光保存。B液2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ●离心机 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后请尽快检测，染色浓度和时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙*固定后检测。以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色也可不用多聚甲*固定，其他方法请参阅相关资料。

1．染色工作液的配制：
根据样品数用 PBS将Hoechst染色液10倍-100倍稀释，配制成染色工作液。
2．细胞涂片的制备：
贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲*固定5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。
对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，1000-2000rpm离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1×105/ml，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲*固定5min；
3．用 PBS 洗涤涂片两次。
4．加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-20分钟。
5．用 10倍稀释的试剂B 洗涤涂片。
6．用荧光显微镜检测结果。染料-DNA 复合物的最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。

结果分析：
置于荧光显微镜下，选用340-350nm的激发光观察：在荧光显微镜下，活细胞呈弥散均匀蓝色荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光。如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。

除了Hoechst33342染色试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
货号：YT129
规格：50次
本试剂盒是一种采用经典的碘化丙啶染色方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。本试剂盒足够检测50个样品，每个样品的细胞数量可以为10-100万。

试剂盒组份：
染色缓冲液——————25ml
碘化丙啶染色液(20X)——————1.25ml
RNase A(50X)——————0.5ml

碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。

碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色

细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。

本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

注意事项：
1. 本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2. 需自备PBS和70%乙醇，PBS。
3. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

名称：Annexin V-PE 细胞凋亡检测试剂盒
货号：SNM528
规格：50T|20T|10T

名称：Annexin V-APC/SytoX双染细胞凋亡检测试剂盒
货号：KFS184
规格：20T|50T|100T

名称：Annexin V-APC/PI双染双染细胞凋亡检测试剂盒
货号：KFS191
规格：20T|100T|50T
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素APC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V- APC 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。

注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-APC/PI 避光保存及使用。
3. PI 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

名称：台盼蓝
货号：SY0511
规格：10g
台盼蓝（Trypan Blue），一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞（活细胞呈透明无色）和死细胞鉴别开来，基于此原理，本品广泛用于细胞活性水平的常规评估。细胞计数前，需要用生理盐缓冲液或者无血清培养基对细胞进行充分的清洗，因为细胞对血清蛋白具有非常高的亲和力，因此残留的血清蛋白会导致较暗的染色背景。

台盼蓝还可染色胶原和淀粉样蛋白。台盼蓝与蛋白结合形成的复合物可发出红色荧光。另外，台盼蓝（合适浓度）还常用来淬灭细胞表面的自荧光或者其他荧光信号。

本品为细胞培养级别，台盼蓝染色法主要用来鉴定组织分离到原代细胞的存活情况。只需3-5min染色，即可通过血球计数法分析结果。

中文别名：直接蓝14;锥虫蓝;曲利苯蓝
英文别名：Direct Blue 14; Dianil blue; Diaminine Blue
CAS：72-57-1
分子式：C34H24N6Na4O14S4
分子量：960.81
外观：棕色至黑褐色、黑色、黑褐色粉末
组分：染料含量，>40%
溶解性：溶于水（10mg/ml）
储存条件：室温
结构式


储存液制备
可称取0.4g台盼蓝溶于100ml 0.85% NaCl或者Hank’s溶液，配制成0.4% 的台盼蓝储存液，建议过滤除杂，室温保存即可。使用时按照1:9（细胞悬液）稀释即可【注：具体的稀释倍数需根据细胞本身的密度做出适当调整，降低稀释倍数或者提高储存液浓度】。染色时间控制在3min左右。因台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数。