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16S/18S/ITS微生物多
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16S/18S/ITS微生物多样性测序
扩增子测序,即对特定长度的PCR产物或者捕获的片段进行测序,主要包括16S rDNA测序、18S rDNA测序及ITS测序等。扩增子测序通常是选择某个或某几个变异区域,利用保守区设计通用引物进行PCR扩增,然后对高变区进行测序分析和菌种鉴定,具有所需样本量少、高通量和高精确性等特点。
1.从测序所得的原始数据出发,首先对原始数据进行质控,得到有效数据(Clean Data);
2.基于有效数据进行OTUs(Operational Taxonomic Units)聚类;
3.根据OTUs聚类结果,一方面对每个OTU的代表序列做物种注释,得到对应的物种信息,另一方面将各个样品的有效数据,和代表序列进行比对,获得对应OTU在各个样品中的丰度分布情况;
4.基于构建好的OTU丰度表,获得不同分类层级的物种丰度表;
5.基于OTU丰度表及不同分类层级的丰度表,进行样品微生物群落组成分析;
6.基于OTU丰度表及不同分类层级的丰度表,进行Alpha多样性和Beta多样性分析;
7.根据研究需求,可选择高级分析,深入挖掘样品中的物种组成和差异。
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