CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒

特别提示：包括CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒
产品货号：HR8302
产品规格：500T

CFSE/PI 双染细胞毒性检测试剂盒是利用细胞荧光染料CFSE(CFDA-SE)和PI对细胞进行染色，利用CFSE标记靶细胞，PI标记死的靶细胞来区分不同的细胞，活的靶细胞成绿色，死的靶细胞成红色和绿色，从而检测细胞毒性作用。根据不同的实验方案设计，可以用来检测化合物的细胞毒性作用。也可以用来检测杀伤性T 细胞或NK 细胞介导的细胞毒作用。
CFDA-SE 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。CFDASE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFDASE在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，进入细胞内的CFDASE的AM 部位能被细胞内酯酶水解生成CFSE，通过共价结合赖氨酸侧链的氨基而掺入细胞内和细胞表面的蛋白，且结合后发出强的绿色荧光。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。
CFSE毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。
CFSE/PI标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞毒性检测。
CFSE标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=496 nm,λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为516nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。PI标记细胞呈红色荧光，流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为647nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL2 detection channel。
CFSE标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞毒性外，还可单染后用于细胞增殖检测，或者用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。

储存条件：CFSE探针-20℃避光保存；溶解液-20℃保存；PI染色液2-8℃避光保存。
有效期：六个月。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS，HBSS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 96孔培养板 ● CO2培养箱 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
●染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。
● 配制的CFSE 母液极易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。
● CFSE工作液应现配现用，不能提前配制，因为CFSE 吸水会分解，影响染色效果。
● CFSE配制成储存母液后宜在一个月内使用完毕，最长不宜超过2个月。CFSE 易被水解，在水溶液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。
● CFSE溶解液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。
● CFSE标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞，最佳标记时间需自行摸索。正式实验前，建议先做几个孔摸索染色浓度和加入CFSE试剂后的培养时间。
●荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
●以下实验步骤仅供参考，请根据实际的实验方案设计或参考相关文献为准。
试剂配制：
1．从冰箱中取出CFSE试剂，静置几分钟至室温。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次，再离心几分钟让粉末充分落入管底后才能开盖。
2．取0.9 ml CFSE溶解液加到CFSE管中溶解，配制成CFSE母液。
【注】:
● 加入溶解液后请先盖上盖子，反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部，并用移液器反复吹打使溶解完全。
● 冬天气温较低时CFSE溶解液会凝固，请先在37℃水浴至溶解液完全融解后再进行配制，配制过程中注意避免溶液凝固，保持温度至CFSE溶解完全。
细胞CFSE染色：
1．根据需要检测的细胞样品数，用HBSS 将CFSE 母液200-4000倍稀释，配制成CFSE染色工作液。不同的细胞需要根据预实验结果确定最佳染色浓度。如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。
【注】:
● 也可以用PBS等缓冲液或相应的无血清培养基稀释染料母液至所需浓度。
● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或培养基稀释CFSE 到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度200-4000倍稀释。
● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和细胞毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。
● 工作液现配现用。
2．将培养好的待测靶细胞消化后收集，用PBS 洗涤2次。(400g离心5分钟)
3．将待测细胞用染色工作液重悬，至细胞浓度大约107/ml。
4．在37℃培养箱中避光孵育15-20分钟。
5．加10倍体积的含血清培养基，400g离心5分钟。
6．离心后去上清，收集细胞，用HBSS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，最后加入培养基重悬细胞。
7．在37℃培养箱中孵育20-30分钟。
细胞模型制备：
1．收集待检测的靶细胞。
2．进行相应的毒性药物处理或者效应细胞处理。
【注】:
● 效应细胞和靶细胞比例根据需要自行设定。常见比例如6、25：1；12.5：1；25：1等。
● 活的靶细胞成绿色；死的靶细胞成红色和绿色；死的效应细胞成红色，活的效应细胞成无色。
细胞检测：
1．收集制备好的毒性处理过的细胞模型。
2．用500μl HBSS重悬细胞，加入10μl PI染色液，混匀。
3．在2-8℃避光孵育5-15分钟。
4．在400g离心5分钟收集细胞。
5．用500μl HBSS或PBS重悬细胞。
6．取500μl 细胞悬液，用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
7．根据流式结果计算死亡细胞百分率。被杀伤死亡的靶细胞被PI染上会出现在CFSE+PI+区域，未杀伤的在CFSE+PI-区域，得出被杀伤的靶细胞的比例。用这个比例再计算毒性。

除了CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒
货号：YT123
规格：100次
本试剂盒是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝，而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色研制而成。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。本试剂盒足够检测100个细胞样品。

试剂盒组份：
台盼蓝染色液(2X)————10ml
细胞重悬液———————100ml

储存条件：4℃，有效期一年。

名称：线粒体蛋白提取试剂盒
货号：SNM525
规格：100T|50T

名称：Annexin V-kFluor594细胞凋亡检测试剂盒(荧光显微镜专用)
货号：KFS194
规格：10T|20T|50T|100T
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素kFluor594 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

本试剂盒可用于悬浮细胞以及贴壁培养的细胞，不适用于组织。

注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-kFluor594 避光保存及使用。
3. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
4. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2% BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
5. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
6. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

名称：微核分析/遗传毒性分析荧光染料
货号：KFS340
规格：10mg
微核分析/遗传毒性分析荧光染料（DAPI）是一种蓝色核酸染料，优先染dsDNA，表现为可集中结合在DNA 双链的AT 小沟，结合后的荧光会发生20 倍增强。同时，也可以结合RNA，与DNA 不同，一般认为DAPI 染料结合于RNA 的AU 区。DAPI/RNA 的复合体（500nm）有比染料与dsDNA 复合体（460nm）更长的荧光波长。DAPI 是一种常用的多色荧光技术中的核复染剂。他的蓝色荧光可以与绿色、红色、橙黄色探针形成鲜明对比。

根据操作说明使用，染料的背景可以很低，几乎没有细胞质的背景标记。DAPI 可以用在多种实验应用中，如细胞学标记、直接或间接地基于抗体的免疫荧光分析以及mRNA 表达的原味杂交或者与特定的细胞结构荧光试剂进行共染。DAPI 也可以用来分析多色流式细胞术中。

名称：p53抑制剂(PFT-α)
货号：SY1065
规格：5mg
Pifithrin-α (PFT--α) 是一种常用的p53抑制剂，可逆性抑制p53依赖性的基因转录活性如细胞周期蛋白 G、p21/waf1/cipl 和 mdm2蛋白的表达。Pifithrin-α不仅抑制p53介导的由细胞毒素诱导的细胞凋亡，还能抑制DNA损伤诱导的细胞凋亡。Pifithrin-α作用于海马细胞，并降低p53-DNA结合活性水平、抑制caspase活化。Pifithrin-α诱导细胞周期阻断，并显著降低DNA合成。另外，与化疗或放射性共同处理癌症时，Pifithrin-α会减轻化疗或放射性对正常组织的副作用。

靶点：p53
CAS ：63208-82-2
分子式：C16H18N2OS•HBr
分子量：367.30
外观：浅白色粉末
纯度：≥95%
溶解性：溶于DMSO
储存条件：-20℃，有效期24个月
结构式


注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）粉末溶解前请先短暂离心，以保证产品全在管底。
3）本产品仅用于科研用途，禁止用于人身上。

名称：7-AAD染色试剂盒
货号：HR0460
规格：100T
7-Aminoactinomycin D，简称7-AAD，是一种核酸染料，与DNA 结合后可发出强烈的荧光，其荧光特性与PI 相似，可被488nm 氩离子激光激发，但其发射光谱较PI窄，且发射波长更长，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，可与多种488 激发光激发的荧光染料联合使用，如FITC，PE等。
另外，7-AAD 是一种非渗透性荧光染料。该染料不能透过活细胞的细胞膜，但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与其内的DNA 结合，可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞，广泛用于流式细胞仪。

储存条件：染液2-8℃避光保存。长期保存-20℃避光保存。试剂B 2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。玻璃器皿上残留的去垢剂也会影响染色的效果，导致细胞存在或不存在都会出现强荧光。玻璃器皿的清洗应用去垢剂，然后用自来水冲洗数遍后，用去离子水或蒸馏水多次漂洗。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 由于细胞凋亡是一个快速和动态的过程，因此最好在染色后立即进行分析。
●染色浓度和时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
本染色试剂盒可用于大多数细胞，但不同的细胞类型、细胞密度、使用的培养基以及其他一些因素都有可能影响染色效果，本说明仅供参考。细胞染色也可不用多聚甲*固定，其他方法请参阅相关资料。

1．染色工作液的配制：用纯水10倍稀释试剂B。
根据样品数用此稀释液将7-AAD染色液20倍-100倍稀释，配制成染色工作液。
2．离心收集细胞，并用合适的的缓冲盐溶液或者培养基(pH=7.4)重悬细胞。
【注】：贴壁细胞可在盖玻片或者培养板上进行原位染色。
3．细胞固定：用4%多聚甲*固定5分钟；根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。7-AAD染色一般在其它染色完成后再进行，且仅仅染色死细胞。
4．加入适量7-AAD染色液工作液，孵育15-60分钟。
5．用荧光显微镜检测结果。染料-DNA 复合物的最大激发波长为545nm，最大发射波长为650nm。流式细胞仪下(FL3 通道)检测荧光强度。