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抗体去除液(Western)

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  • 百奥莱博
  • 北京
  • 2025年07月14日
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      441

    • 保质期

      一年

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    • 保存条件

      室温

    • 规格

      100ml

    特别提示:包括抗体去除液(Western)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


    产品名称:抗体去除液(Western)
    产品货号:HR0351
    产品规格:100ml

    本产品可以对同一张膜进行多次Western Blot检测。在室温条件下,将用过的膜浸泡在抗体去除液中30-60分钟,可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后,可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验,因而可利用同一张膜进行多次蛋白检测。适宜从少量样品多次检测多种不同蛋白质。采用这方法多次检测同一张膜上的蛋白,能省去蛋白电泳和膜转移等费时费力的步骤。

    储存条件:室温保存
    有效期:一年
    用途:
    清除硝酸纤维素膜或PVDF膜上结合的抗体,不影响抗原蛋白。

    使用方法:
    1.将膜充分浸泡于适当体积的抗体去除液中,室温孵育15-30分钟并不时晃动。孵育时间的长短应根据实验条件进行优化。洗脱某些抗体需要较长的时间如30-60分钟。
    2.用镊子取出膜,用自备Western Blot 洗涤缓冲液快速淋洗膜一次,然后用TBST洗膜3次,每次10分钟。
    3.此时膜上抗体已去除膜已经再生。用脱脂奶粉或BSA 封闭一小时,进行下一轮Western Blot实验。

    注意事项:
    1.有许多因素影响抗体从膜洗脱,如膜类型、抗体类型和浓度及其与抗原结合特性。因此需要优化抗体去除液中孵育膜的时间。
    2.确定膜上抗体是否去除与优化抗体去除液孵育膜的时间:用ECL 工作液孵育再生后的膜约1分钟,然后进行X 光胶片曝光并显影,可确定膜上的抗体是否完全去除。如胶片上显示条带,表明抗体未完全去除,应继续将膜浸泡在抗体去除液中另外孵育30-60分钟。然后再次ECL检查膜上抗体是否去除。重复此步骤直到抗体完全去除并确定最佳孵育时间。
    3.使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用BSA 封闭的膜上的抗体更容易被去除下来。因此准备进行再生的膜,应该使用脱脂奶粉而不是BSA 封闭。
    4.尽量避免使用干燥保存的膜,干的膜上的抗体很难被去除干净。
    5.PVDF膜上使用的效果好于硝酸纤维素膜。
    6.使用非化学发光试剂进行的Western检测,例如DAB,NBT/BCIP,不适用于本试剂。

    除了抗体去除液(Western),,我公司还供应以下相关产品:


    WE0262 哺乳动物蛋白抽提试剂盒 25次|100次
    SNM408 PMSF(100mM) 1ml
    KFS010 免疫染色一抗稀释液 100ml
    SY0373 10%预制胶,12孔 1盒(10块)
    SY0397 GST标签蛋白纯化预装柱 1ml|5ml
    QN1084 5×蛋白上样缓冲液(含DTT) 10ml
    HR0183 细菌膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用) 50T/100T
    HR8086 真菌蛋白快速提取试剂盒(离心柱法) 50T/100T
    HR0373 改进型蛋白电泳考马斯亮蓝脱色液 100ml
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    GL1550 通用显影液 500ml

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    图标文献和实验
    相关实验
    • Western 实验步骤

      BSA 蛋白标准、BCA 试剂、PBS。 1) 标准曲线:用 BSA 和 PBS 混合总体积为 20 μL 的溶液做标准曲线,具体操作如下:按照 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 含量稀释 BSA 蛋白标准品,每个浓度(0、4 μL、8 μL、12 μL、16 μL、20 μLBSA,其余用 PBS 补齐至 20 μL)梯度做一个复孔。 2) 样品稀释测蛋白浓度:10 倍稀释法:取 18 μLPBS+2 μL 样品上清(经上步处理的样品 12000 r/min 离心 5 min

    • 细胞上清提取常见问题解析

      培养 24 - 48 h,细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清,该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基: 待细胞汇合度~50%时,移去原有完全培养基,添加新培养基进行培养,新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成; 待细胞生长汇合度约为70-80%时,移去培养基; 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次; 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h,待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清,该上清液即可用于外泌

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        界 liquid junction 指二种浓度或不同组成的电解质的接触面。界可简单地把比重轻的溶液由重叠在重之上而形成,但随着时间的进行,由于扩散或对流等可多少出现液体的混合。为防止混合可采取放置多孔质的膜以延缓扩散,或不断流动液体更新界等方法。在界上可产生界电位( liquid junction potential, EL )。比较简单的是在浓度不同的同一种一价的电解质溶液间或浓度相同并且具有共同的离子的不同的电解质溶液间的情况下,界电位的大小与界的混合

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