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标本溶血:
1、脱水、休克等疾病使得穿刺困难而溶血;
2、抽血器质量不合格导致溶血;
3、血清分离不当导致溶血;
4、红细胞有先天或获得性缺陷而易破坏溶血;
5、患溶血性疾病。
溶血的干扰机理:
1、血细胞中浓度远高于血清浓度:血细胞中高浓度物质溢出,测定结果偏高。如K、CK、LDH、AST等,轻度溶血即可有很大影响。
2、血细胞中浓度低于血清浓度:此时溶血相当于血清稀释而结果偏低。如血糖、r-GT等。
、检测大多是检测化学反应前后颜色变化程度来计算待检物浓度。血红蛋白的红颜色会造成干扰。
控制影响因素:
开展常规项目的室内质量控制,绘制质控图和观察室内环境;谨慎使用检测方法学;
在使用某一方法时,先虑标本量是否太少或血清凝固,需重新处理标本进行测定;如果是采用速率法,要考虑是否是酶活力过高;动态反应曲线是否正常,注意有无提示数据报警;
仪器方面,如果发现某一时间的结果全部偏低,就要考虑是否引入了系统误差,是否发生仪器的样品针堵塞,搅拌棒搅拌不均等情况,或样品针注射器漏气,或试剂的交叉污染,或光源灯老化等问题;避免标本的溶血或脂血现象。
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文献和实验4. 保温液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1g、0.05% PBSTween20 100ml,4℃保存。 5. 底物溶液(OPDH2 O2 ) 磷酸盐柠檬酸缓冲液(pH5.0):0.2mol/L Na2 HPO4 (28.4g/L)25.7ml、0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L)24.3ml、蒸馏水50ml。 底物溶液:磷酸盐柠檬酸缓冲液100ml、邻苯二胺(OPD)40mg、30%H2 O2 0.15ml,现配现用。 6. 终止液(2mol/L
1.DEAE-Sephadex A-25离子交换层析法 ⑴ 用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液平衡DEAE-Sephadex A-25柱。 ⑵ 加样后,用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱12h~14h。 ⑶ 改用0.4mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱,流速0.15ml~0.2ml/min,收集流出液,测OD275nm。 ⑷ 测SPA活性(以对流免疫电泳),能与人及猪正常血清产生沉淀线的各管合并。 ⑸ 浓缩或冻干保存。 2.Sphadex G100凝胶过柱法
。 (7) 以0.05mol/L pH 7.4 PBS 透析过夜。 (8) 过Sephadex G100柱(100cm×2cm),以0.5mol/L pH7.4 PBS 液洗脱,流速10ml/h。 (9) 测OD403nm,集SPA-HRP活性部分。 (10) 将高活性组分合并,加入甘油(含30%)置低温保存。也可以采用过碘酸钠法,制法如下:①5mg HRP溶于1ml新配制的0.3mol/L pH 8.1的NaHCO3液中;②加入无水乙醇配制1%1-荧光-
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