考马斯亮蓝G250染料试剂

考马斯亮蓝G250染料试剂由考马斯亮蓝G250、乙醇、磷酸组成，用于考马斯染料结合(Bradford)分析的总蛋白测量，其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合剂、还原性物质等均不排斥。检测浓度下限达到25μg/ml，小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl，在50~1000μg/ml浓度范围内有较的线性关系。

Bradford 法是常用的蛋白浓度检测的方法，与传统方法相比，更简单、更稳定、兼容性更。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。但受高浓度的去垢剂的影响明显， 故在用Bradford Protein Assay Kit进行蛋白定量时，需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20, 60, 80低于0.015%，含高浓度去污剂的蛋白定量，建议采用BCA Protein Assay Kit。

自备材料：
1、 酶标仪或分光光度计
2、 蒸馏水
3、 96孔板
 
操作步骤(仅供参考)：
1、 稀释蛋白标准(一般为BSA 5mg/ml)使其终浓度为0.5mg/ml。注意：蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也应用什么溶液稀释，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准。
2、 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释液补足至20μl。
3、 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液至20μl。
4、 各孔加入200μl考马斯亮蓝G250染料试剂，室温放置3～5min。
5、 酶标仪测定595nm波长处的吸光值，560~610nm之间的波长也可。
6、 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
 
注意事项：
1、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
2、 需可检测560~610nm之间波长的酶标仪一台，佳检测波长为595nm。
3、 建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定应每次都做标准曲线。
4、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比色皿的小检测体积。应按比例适当加大考马斯亮蓝G250染料试剂的用量使总体积不小于小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。