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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 库存:
大量
- 供应商:
上海机纯实业有限公司
- 规格:
100ml
注意事项:
1、 如待检测组织富含内源性链亲和素-生物素,应考虑使用非链亲和素-生物素检测系统。
2、 避免反复冻融,否则容易失效。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤(仅供参考):
1、 切片脱蜡、水化。
2、 入内源性链亲和素封闭液,孵育20min。
3、 PBS或Tris缓冲液中清洗5min。
4、 进行免疫染色的步骤。
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文献和实验不完全,若存在,需延长脱蜡时间或换用新的二甲苯。 (5)抗原修复不完全:对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合。 (6)细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应:可加入组织透化步骤,进行细胞膜或核膜的透化。 (7)试剂盒保存不当:请于 4℃ 进行保存,勿室温防止过长时间。 (8)封闭时间过长:若使用封闭液进行封闭,请排除封闭液对抗原抗体结合的影响。 Q2:免疫组化染色弱怎么办? (1)抗体浓度过低,孵育时间过短:可提高抗体浓度,进行抗体4℃过夜孵育。 (2)组织
一抗和二抗与非特异性位点结合。通透后用PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加山羊血清,室温封闭30min。常用的封闭液包括:与二抗同一来源的血清、BSA或者是羊血清。从封闭开始所有的步骤,一定要注意样品的保湿,避免样品的干燥,否则极易产生较高的背景。醛类固定的样品,在用一抗孵育前用含0.3M甘氨酸的封闭液进行封闭。 4. 一抗孵育 根据一抗说明书,按照适当比例用一抗稀释液稀释一抗,用吸水纸吸尽封闭液,每张玻片滴加稀释好的一抗并放入湿盒, 4℃孵育过夜。回收一抗,加入
我的石蜡切片又「团灭」了!没关系,专业技术人员与您并肩推塔!
。5. 洗涤:切片浸没于dH2O中,3 ×5 min。去除内源性过氧化物酶6. 3% 过氧化氢处理切片,加盖室温放置15 min。(加盖的目的是为了防止过氧化氢与空气接触后并不稳定)7. 洗涤:切片浸没于dH2O中,2 ×5 min。8. 缓冲液转换:切片浸没于TBST中,1 ×5 min。封闭与一抗孵育9. 配置封闭液(Animal-Free Blocking Solution #15019),滴加在切片上,室温静置1 h。(此步建议一张张完成,防止干片)10. 配置一抗:使用SignalStain®
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