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HiScript II U+
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HiScript II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit
上海信裕生物科技有限公司
250 rxn(20 μl/rxn)
• 热不稳定(Heat-labile)的UDG酶室温下迅速降解含U的双链DNA污染物
• 热不稳定(Heat-labile)的UDG酶在55℃迅速彻底失活,维持cDNA的完整性
• 可检测到个位数拷贝的模板或0.1 pg总RNA
• 支持多重探针检测
图1.HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit (Q223)提供良好的检测灵敏度和线性关系。
以Hela细胞总RNA为模板,用HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit (Q223) 扩增RFLPO 基因。由图可见,优化的dUTP浓度以及Heat-labile UDG使得扩增效率和灵敏度不会受到影响。相比之下,E.coli来源的UDG会严重影响one step RT-qPCR的检测灵敏度。
图2.dUTP/UDG防污系统原理示意图
dUTP/UDG防污染系统是一种非常有效的控制PCR扩增产物污染的手段。在以DNA为模板的PCR检测试剂中,已逐渐成为了一种强制标准。不过,常用的E. coli UDG在通常的逆转录温度 (42-55℃) 下仍具有较高的活性,会降解cDNA,导致One Step RT-PCR/qPCR的灵敏度降低。HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit含有比例优化的dUTP/dNTP mix,并加入了来源于嗜冷海洋细菌的Heat-labile UDG。Heat-labile UDG在室温下具有很高的活性,在反应体系混合过程中即可充分降解含U的双链DNA污染物。当反应体系升温至50-55℃ (HiScript® II的最适反应温度) 时,Heat-labileUDG迅速彻底失活,维持cDNA的完整性,保证检测灵敏度不受影响。
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