采用Reaction Biology Corp开展HDAC抑制试验。在Sf9细胞中,使用杆状病毒表达系统表达人类重组全长HDAC1和HDAC6,并将其分离。以RHKKAc(来自p53蛋白379-382位点的乙酰化荧光标记多肽)为底物。反应缓冲液包括50 mM Tris-HCl pH 8.0,127 mM NaCl,2.7 mM KCl,1 mM MgCl2,1 mg/mL BSA,终浓度为1%的DMSO。将化合物先溶于DMSO中,再将其转移到酶混合物中,预孵育5 ~ 10分钟,随后加入底物,在30 °C下,将其孵育2小时。将Trichostatin A 和显影液加入到缓冲液中,终止反应并产生荧光。30 μM的化合物以3倍稀释比例连续稀释,产生10个数据点。制作剂量-反应曲线。通过剂量-反应曲线计算IC50值,实验数值表示为:两次试验的平均值±标准差。
参考文献: [1] Kalin J H, Bergman J A. Development and therapeutic implications of selective histone deacetylase 6 inhibitors. Journal of medicinal chemistry, 2013, 56(16): 6297-6313. [2] Zhang L, Han Y, Jiang Q, et al. Trend of Histone Deacetylase Inhibitors in Cancer Therapy: Isoform Selectivity or Multitargeted Strategy. Medicinal research reviews, 2014.