测序级V8蛋白酶

特别提示：包括测序级V8蛋白酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：测序级V8蛋白酶

产品货号：测序级V8蛋白酶
产品规格：50μg/2mg

Cat.No.：66676-43-5
EC：3.4.21.19
全名: 序列分析纯V8蛋白酶；金黄色葡萄球菌V8蛋白酶
别名: V8蛋白酶；谷氨酰胺内切酶；天冬酰胺内切酶
储存条件：冻干粉，2-8℃
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达。

1.产品简介
V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族，能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键，在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键，且对Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性，最适pH为8.0-8.5。在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时，可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙*(代"基")氟磷酸(DFP)、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲*磺酰基-L-赖氨酸氯甲基*(代"酮")(TLCK)。
2.产品特性
来源：重组大肠杆菌
产品外观：白色、类白色、类黄色粉末
比活 ≥ 5.0 AU /mg pro.
蛋白电泳：单一主条带
分子量：24.0±2.4 kDa单位定义：在25℃，pH7.8的条件下，每分钟催化底物(Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide)生成1μmol对硝基*(代"苯")*(4-nitroaniline)所需要的酶量为一个酶活性单位
3.储存和运输稳定性
储存稳定性：重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃，24个月稳定；
溶解后稳定性：用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下(1mg/ml)，6个月稳定；用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃(1mg/ml，无菌)，2个月稳定；用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃(0.5mg/ml)12h，活性可维持85%以上；溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。
运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。
4.推荐使用方法
1)使用前注意
可按使用量分装以最大限度避免污染或自切。
2)目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白，例如25-50mM NH4HCO3 pH7.8，若溶解度不好对目的蛋白变性，添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。
3)酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100(W/W)，25℃或37℃酶切2-18h。
5.产品优势
序列分析纯蛋白酶：特异性高，稳定性好。
无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。
质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产 品批次间无差异，质量稳定。
纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
冻干粉：易于储存和运输。
符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。
质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

除了测序级V8蛋白酶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：T3 RNA聚合酶
货号：BTN120309
规格：1000U
本酶是噬菌体T3 DNA编码的酶，对T3启动子序列具有高度特异性，不能识别其它生物来源的启动子。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，以含有T3启动子序列的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的单链DNA互补的RNA。

产品用途：
1．为Northern杂交以及Southern杂交制作高标记探针。
2．制作 RNA 剪接反应的前体。
3．以帽类似物为引物，制作Capped mRNA。

产品组成：

成份	规格
T3 RNA聚合酶	50μL(20U/μL)
5×转录缓冲液	0.25mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1个活性单位是指在37℃、60分钟内将1nmol的AMP合成掺入到寡聚核苷酸片段(DE-81光吸收形式)所需的酶量。

名称：AfeI限制性内切酶
货号：SV0019
规格：1KU|200U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 25%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
Afel是Eco47lll的完全同裂酶。

名称：AvaII限制性内切酶
货号：SV0073
规格：10KU|10KU|2KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000和50,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dcm 和哺乳动物 CpG甲基化敏感。

名称：BtsαI限制性内切酶
货号：SV0280
规格：2500U|500U
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 100%
特性
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件
CutSmart 缓冲液，55℃。
浓度
10,000units/ml。
37℃ 时活性
75%。
甲基化敏感性
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项
如下条件可能出现星号活性:延时酶切、高酶浓度或甘油浓度＞5%。

名称：MspJI限制性内切酶
货号：SV0505
规格：1KU|200U
特性:
MspJl是经 EpiMark验证过的产品，是一种修饰依赖型核酸内切酶，能够识别 mCNNR 位点并能在修饰的胞嘧啶 3´ 一侧 N9/N13 处切割双链 DNA。能被识别的胞嘧啶修饰有:C5-甲基化胞嘧啶(5–mC)和 C5-羟甲基化胞嘧啶(5-hmC)。
反应条件:
1X BalbBuffer 4 + BSA + 1X 酶活性液，37℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
5,000units/ml。
注意事项:
延长酶切时间可能会出现星号活性。

名称：热启动 Taq DNA 聚合酶
货号：SV0862
规格：1KU|200U
概述:
Taq DNA聚合酶是一种耐热聚合酶，具有 5´→3´聚合酶活性和 5´ 结构特异性核酸内切酶活性。该酶是 PCR中应用最广泛的酶。为了便于各种 PCR 反应，Taq DNA聚合酶配套有不同的反应缓冲液。标准 Taq 缓冲液专门针对已有的 PCR 平台所设计，它是 DHPLC 和高通量实验的理想选择。我公司供应的 ThermoPol 缓冲液能够提高反应产量，即使是在苛刻的条件下也表现不凡。此外还提供了 Quick-Load Taq 2X 预混液剂型，可用于直接凝胶上样。更为方便的是，Taq DNA聚合酶还有试剂盒以及预混液两种剂型可供选择。
热启动 Taq DNA聚合酶:
超高的性价比、引人注目的商业宣传，我公司的热启动 Taq 是分子诊断和其它应用的理想选择。与化学修饰或基于抗体结合的热启动聚合酶不同，我公司的热启动 Taq 利用一种基于核酸适配体(aptamer)技术。这种独特的核酸适配体通过非共价键作用与聚合酶结合，从而抑制聚合酶在非许可温度下的聚合反应。这种新方法不需要激活步骤，减少样品降解的可能性、缩短整个反应时间。
其它剂型:
为了加样方便，Taq 与热启动 Taq DNA聚合酶均有预混液剂型可供选择。Taq 2X Master Mix 还有 Quick-Load的形式，可用于直接凝胶上样。Taq PCR试剂盒包含 Taq DNA聚合酶、dNTP 混合液、缓冲液、MgCl2 和Quick-Load 2-Log DNA Ladder。
多重 PCR 5X Master Mix 配方经过专门优化可以提高多重 PCR 反应的性能。
浓度:
5,000units/ml。

名称：E coli RNA 聚合酶, 核心酶
货号：SV1335
规格：100U
特性:
T7 非依赖型转录启动研究
PURExpress 体外转录
概述:
E. coli RNA 聚合酶，核心酶由 5 种亚基组成，分别为 α、α、β´ 、β、和 ω。此酶无 σ 因子，因此不会对细菌和噬菌体 DNA 启动子特异性启动转录。本酶保留了从非特异性启动序列转录 RNA 的功能。添加 σ 因子后，本酶可从特定细菌和噬菌体的特异启动子启动合成 RNA。核心酶分子量约 400 kDa。
E. coli RNA 聚合酶，全酶由核心酶和 σ 因子 70 组成，能从 σ 因子 70 特定的细菌和噬菌体启动子处起始合成RNA。
来源:
大肠杆菌 RNA 聚合酶，核心酶是由大肠杆菌 BL21 分离而得。σ 因子 70 是由携带 σ 因子 70 克隆基因的大肠杆菌纯化而来。
反应条件:
40 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM KCl，10 mM MgCl2，0.01% Triton-X-100，1 mM DTT，每种 rNTP 各 0.5 mM 和 DNA 模板。37℃ 温育。
质保声明:
无 DNA 内、外切酶和 RNase 污染。
单位定义:
1 单位是指在 37℃ 条件下，10 分钟内可将 1 nmol NTP 掺入 RNA 所需的酶量，单位活性检测条件请联系我们咨询 。
浓度:
1,000 units/ml。

名称：T4连接酶
货号：JN0066
规格：28KU
  T4 DNA连接酶常用于催化双链DNA平末端或互补粘性末端之间的 连接反应，也能催化双链RNA 5′-磷酸末端和3′-羟基末端间的连接。还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。以上反应均需消耗ATP。

产品组成：

组份	体积
T4 DNA连接酶 （350U/μl）	80μl
2×Quick Ligation Buffer	1ml
10×T4 DNA Ligation Buffer	1ml

产品特点：
随酶附带10×T4 DNA Ligation Buffer及独特配方的2×Quick Ligation Buffer提供给您更多的选择：而使用10×T4 DNA Ligation Buffer，16℃过夜连接可获得最高的连接效率；使用快连Buffer在室 温(25℃)下，仅需5分钟即可完成粘性末端或平滑末端DNA片段的连接 反应。

产品用途：
1、DNA片段和载体DNA的连接。（参见实验方案）。
2、DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。

使用建议：
1、粘末端的连接反应：插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要，此比例在2-6之间最好，低于2:1就会导致较低的连接效率，高于6:1则会导致多个插入。摩尔比请按载体与插入片段DNA浓度及分子大小来计算。
2、平滑末端的连接反应：平滑末端的连接反应与突出末端相比反应较慢(其Km值约为突出末端的100倍)。进行平滑末端的连接反应时，可提高DNA浓度，将使用酶量增加到突出末端量的2～5倍左右。
3、向粘粒或噬菌体进行连接反应：可使载体和插入DNA的摩尔比调整为1:1，同时增大DNA浓度以便取得良好效果。(0.05～0.1μg／μl以上)
4、反应温度： 该酶的最适温度为37℃，由于热稳定性较差，因此 长时间反应时通常需在16℃下进行。若反应1-2小时左右的话也可在室 温下进行反应。
5、抑制剂：T4 DNA连接酶要求Mg2+，因此螯合Mg2+的EDTA的存在会阻碍反应。将溶解于含有高浓度EDTA缓冲液中的DNA准备作为样品使用，最好先用灭菌蒸馏水或TE缓冲液进行置换。

应用实例：

图 例 1 ） 在25℃，用不同活性单位（2U、4U、6U）T4 DNA连接酶与λDNA/Hind III 片段作用10分钟后的结果以及连接产物灭活T4连接酶后再次使用Hind III酶切结果。
泳道1：λDNA/Hind III；
泳道2：λDNA/Hind III+2U T4 Ligase；
泳道3：λDNA/Hind III+4U T4 Ligase；
泳道4：λDNA/Hind III+6U T4 Ligase；
泳道5：λDNA/Hind III ,T4 Ligase连接产物，Hind III酶切

活性定义：在20μl的连接反应体系中, 6μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时, 有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个单位。

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

快速连接步骤：
1、取50 ng载体和3倍摩尔量的插入片段，用双蒸水调整总体积为10μl。
2、加入10μl 2×Quick Ligation Buffer，混匀。
3、加入0.5～1μl T4 DNA连接酶，充分但轻柔混匀（切勿剧烈震荡，可能导致酶部分失活）。
4、稍事离心，置于室温 (25℃) 作用5分钟。
5、冰上放置，转化（如不立即进行转化实验请冻 存于-20℃）