300nm链霉亲和素磁珠

特别提示：包括300nm链霉亲和素磁珠在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：300nm链霉亲和素磁珠
英文名称：Streptavidin
产品货号：CZ015
产品规格：1ml/10ml/100ml

产品简介：
链霉亲和素-生物素(SA-Biotin)系统具有极高的结合亲和力(Kd=10^-15)，在生物领域具有广泛的应用。Streptavidin采用蛋白偶联技术将SA共价连接于固相载体表面，可高效结合生物素化抗体、核酸、蛋白等配体分子。本产品采用超顺磁性微球，粒径均一、形貌规整，有利于方便、快捷地捕获目标分子以及实现磁性分离。本产品可配套自动化设备进行高通量操作。
结合生物素化分子操作流程(本操作以适用于链霉亲和素磁珠系列所有产品，详见产品列表)：
1. 使用前准备
1.1 缓冲液：以下为常用的缓冲液成分，用户可根据需要调整缓冲液的盐浓度及pH
1.2 Buffer I(适用于结合生物素化核酸)：10 mM Tris-HCl(pH 7.5)，1 mM EDTA，1 M NaCl，0.01%～0.1% Tween-20
1.3 Buffer II(适用于结合生物素化抗体/蛋白)：PBS，pH 7.4，含0.05% Tween-20，可根据需要添加0.01%～0.1% BSA
1.4 磁性分离器：可选用磁性分离器，Cat.No.60201，适用于1.5 mL、2 mL或15 mL离心管
1.5 漩涡振荡器
1.6 旋转混合仪
1.7 移液器及吸头
1.8 合适的离心管
2. 结合生物素化核酸
2.1. 将磁珠瓶置于漩涡振荡器上20 s，振荡重悬磁珠。用移液器移取100 μL磁珠到新的离心管中。将离心 管置于磁性分离器上，静置1 min(此操作后续简称为磁性分离)，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下离心管。
备注：用户可根据生物素化分子的多少，参考产品信息表中磁珠的载量，计算需要取用的磁珠量。建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的1～2倍，使磁珠饱和。
2.2. 加入1 mL Buffer I到离心管中，盖上离心管盖，充分振荡重悬磁珠。磁性分离，移去上清液。
备注：当步骤2.1取用磁珠体积大于1 mL时，加入与磁珠体积相同的Buffer I。
2.3. 重复“步骤2.2”一次。
2.4. 加入500 μL的用Buffer I稀释的生物素化核酸(使磁珠浓度为2 mg/mL)，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合30 min。
2.5. 磁性分离，将上清液转移至新的离心管。
2.6. 按“步骤 2.2”的方法洗涤磁珠三次。
2.7. 根据后续实验的要求，加入合适的低盐缓冲液，重悬磁珠。至此结合生物素化核酸步骤完成。磁珠可用于后续操作。
2.8. 用户可以通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到磁珠上的核酸量﹝(反应前浓度-反应后浓度)×反应溶液体积﹞。
3. 结合生物素化抗体/蛋白操作流程
3.1 将磁珠瓶置于漩涡振荡器上20 s，振荡重悬磁珠。用移液器移取100 μL磁珠到新的离心管中。磁性分离，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下离心管。
备注：用户可根据生物素化分子的多少，参考产品信息表中磁珠的载量，计算需要取用的磁珠量。建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的1～2倍，使磁珠饱和。
3.2 加入1 mL Buffer II到离心管中，盖上离心管盖，充分振荡重悬磁珠。磁性分离，移去上清液。
备注：当步骤3.1取用磁珠体积大于1 mL时，加入与磁珠体积相同的Buffer II。
3.3 重复“步骤3.2” 两次，共洗涤三次。
3.4 加入1 mL用Buffer II稀释的生物素化抗体/蛋白(使磁珠浓度为1 mg/mL)，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合60 min。
3.5 磁性分离，将上清液转移至新的离心管。
3.6 按“步骤3.2”的方法洗涤磁珠五次。
3.7 根据后续实验的要求，加入Buffer II或其他合适的缓冲液，重悬磁珠。至此结合生物素化抗体/蛋白步骤完成。磁珠可用于后续操作。
注意事项：
1. 应避免对磁珠进行冷冻等操作。
2. 为减少磁珠损失，每次磁性分离的时间应不少于1 min。
3. 从磁珠保存管中移取磁珠前应充分震荡重悬均匀。操作过程中应避免产生气泡。
4. 建议使用质量好的移液器吸头和反应管，避免因粘附磁珠及溶液而造成损失。
5. 生物素化分子的大小会影响磁珠的载量。用户需要根据实验确定磁珠对特定生物素化分子的载量。
6. 生物素化分子的加入量应为磁珠载量的1～2倍，以使磁珠饱和。
7. 本产品仅供研究使用。

除了300nm链霉亲和素磁珠,，我公司还供应以下相关产品：



名称：钴离子螯和His-tag蛋白纯化磁珠
货号：CZ006
规格：5ml/2×50ml/4×250ml
产品简介：
组氨酸标签蛋白纯化磁珠具有超顺磁性，专为高效、快速纯化组氨酸标签蛋白而设计的一种新型功能化材料。可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大地简化纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业领域便捷地进行组氨酸标签蛋白纯化。
与传统层析方式使用的金属螯合琼脂糖预装柱相比，采用磁珠纯化组氨酸标签蛋白，无需对样品进行多次长时间的高速离心和滤膜过滤、无需控制流速、更无需高昂的层析设备。样品与磁珠的特异性结合、洗涤以及目标蛋白的洗脱变得简单、快速、易操作。对于熟练的操作者而言，在1 h内就能获得高纯度的目标蛋白，且能轻松实现高通量和大规模样品的平行处理，为研究者节省了时间和成本。
本产品系列包括镍离子(Nickel)、钴离子(Cobalt)两种金属离子螯合磁珠，它们在目标蛋白结合量和非特异性吸附等性能上有所区别，用户可根据目标蛋白与不同种类金属的结合性能，以及对目标蛋白的产量和纯度的要求，选择不同种类的金属离子螯合磁珠。具体产品信息及规格参考《产品特性》。
保质期 在2～8℃可稳定保存，保质期2年
注1：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性有关，此处仅做参考值
注2：1 mL 磁珠悬液中包含100 μL磁珠
注3：磁珠溶剂耐受性请参考附录信息
适用范围：
适用于纯化细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分泌或胞内表达的可溶性组氨酸标签蛋白，也可用于变性蛋白的纯化(包涵体需变性后再进行纯化)。
操作流程：
1. 缓冲液的准备
目标蛋白与组氨酸标签蛋白纯化磁珠的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率，而各种缓冲液配制也将在一定程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。因此，在较大规模蛋白纯化之前，用户应该自行设计实验，筛选出适合纯化目标蛋白的缓冲液体系，主要包括Binding Buffer、Washing Buffer、Elution Buffer。
增加咪唑浓度进行洗脱是组氨酸标签纯化磁珠zuì常用的洗脱方法，首次使用时，在不确定zuì佳的洗脱咪唑浓度情况下，推荐在缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、300 mM、400 mM、500 mM咪唑，浓度从低到高分别洗脱，磁吸后收集蛋白上清液，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
以下提供的缓冲液体系适用于多数组氨酸标签蛋白的纯化，供用户参考。
Binding Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，5～50 mM Imidazole，pH7.4
Washing Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，50～100 mM Imidazole，pH7.4
Elution Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，500 mM Imidazole，pH7.4
2. 样品处理
本说明书提供以下三种样品的处理方法：
(1)大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白：表达细胞用适量的Binding Buffer稀释，加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF)，重悬细胞，冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品。如果样品过于粘稠，可根据需要在粗样品中加入适量核酸酶，冰浴30 min，以降解核酸。另外，用户也可以根据实际需要对蛋白样品进行离心操作。
(2)胞外表达蛋白：取胞外表达上清，用等量Binding Buffer稀释，即为粗蛋白样品。
(3)动物细胞胞内表达蛋白：取适量动物细胞，先用适量PBS洗涤1次，弃上清；接着用适量含1%(v/v)Triton X-100或1%(v/v)NP-40的Binding Buffer重悬，加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF)，冰浴10 min，即为粗蛋白样品。
3. 磁珠预处理
一般情况下，磁珠的使用量是由用户根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得。例如：采用大肠杆菌表达某目标蛋白，500 mL发酵液收获2 g湿重的菌体，通过预实验估算其目标蛋白产量为10～20 mg，用户需要取5 mL磁珠悬液用于目标蛋白的纯化。以下即以此为例进行详细说明：
(1)将磁珠产品置于漩涡混匀器上充分混匀，用移液器取5 mL磁珠悬液于15 mL离心管中，进行磁性分离*，弃上清液，从磁性分离器上取下离心管。
(2)加入5 mL Binding Buffer到上述装有磁珠的离心管中，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮；进行磁性分离，移去上清液。重复洗涤2次。
(注*：在磁性分离过程中，为了减少磁珠在使用过程中的损耗，待溶液变澄清后，盖紧离心管盖子，保持离心管仍在磁性分离器上，手持磁性分离器与离心管上下翻转数次，使澄清的溶液涮洗离心管盖上残留的磁珠，静置片刻，使溶液重新变澄清；以下同。)
4. 目标蛋白与磁珠结合
(1)用10 mL Binding Buffer悬浮2 g湿重的菌体，进行破碎和裂解之后，即为目标粗蛋白样品，加入到装有预处理磁珠的离心管中，将离心管置于漩涡混匀器振荡15 s。
(2)将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合20～30 min(如果需要，可以在2～8℃ 的低温环境下，旋转混1 h，防止目标蛋白降解)。
(3)将离心管置于磁性分离器上进行磁性分离，移出上清液至新的离心管中以备后续检测，从磁性分离器上取下离心管进行后续洗涤步骤。
5. 磁珠洗涤
(1)加入10 mL Washing Buffer到装有磁珠的离心管中，轻轻翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，移出清洗液到新的离心管中，以备取样检测。重复此步骤1次。
(2)加入10 mL Washing Buffer到装有磁珠的离心管，使磁珠重新悬浮，将磁珠悬液转移到新的离心管(避免原离心管壁上非特异性吸附蛋白污染目标蛋白)，磁性分离，移出上清液到清洗液收集管。
6. 目标蛋白洗脱
(1)用户可根据需要改变洗脱体积调整目标蛋白浓度，加入2～10 mL Elution Buffer，轻轻翻转离心管数次，使磁珠悬浮，磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标蛋白样品。
(2)如果需要，可以重复上述步骤1次，收集样品到新的离心管中，以检测目标蛋白是否洗脱完全。
7. 磁珠后处理
(1)在装有磁珠的离心管中加入5 mL Elution Buffer，上下翻转离心管数次，使磁珠悬浮，磁性分离，去除上清液。
(2)重复上述步骤2次。
(3)在离心管中加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠悬浮，磁性分离，去除上清液。
(4)重复上述步骤2次。
(5)加入Storage Buffer到磁珠中使总体积为5 mL，保存于2～30℃(长期保存，置于2～8℃)，可用于下一次同种蛋白的纯化。
8. 磁珠再生
磁珠连续使用三次以上，其结合目标蛋白的能力可能会明显降低，建议进行磁珠再生处理。
Stripping Buffer：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，100 mM EDTA，pH 7.4
Beads Washing Buffer(可选)：0.5 M NaOH，2 M NaCl
Recharge Buffer：100 mM NiSO4/CoCl2(该化学试剂有一定的毒性，可能造成过敏反应，使用时务必注意)
Storage Buffer：20%(v/v)乙醇
以5 mL 10%(v/v)磁珠悬液为例，详细说明磁珠再生操作：
(1)将磁珠悬液进行磁性分离，去除上清液，从磁性分离器上取下离心管，在离心管中加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，去除上清液。
(2)加入5 mL Stripping Buffer，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，室温旋转混合5 min，磁性分离，去除上清液。重复此步骤1次。
(3)加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，去除上清液，重复此步骤2次。
(4)碱处理：加入5 mL Beads Washing Buffer，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，室温旋转混合5 min，磁性分离，去除上清液。加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，去除上清液。重复 ddH2O洗涤步骤3～5次，至洗涤液呈中性为止。
(5)加入5 mL Recharge Buffer，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，室温旋转混合20 min，磁性分离，去除上清液。
(6)加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，去除上清液。重复此步骤4次以上，保证镍离子去除完全。
(7)加入Storage Buffer到磁珠中使总体积为5 mL，保存于2～30℃(长期保存，置于2～8℃)。
蛋白纯化流程的优化：
以上操作流程适用于大部分组氨酸标签蛋白的纯化，根据目标蛋白与金属离子螯合磁珠的结合性能不同，用户可以从以下几个方面对纯化流程进行优化，以提高目标蛋白的回收率和纯度。
提高目标蛋白回收率的参考方法：
(1)降低样品溶液和Binding Buffer中的Imidazole浓度；
(2)样品溶液和其它缓冲液中添加表面活性剂等物质；
(3)添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
(4)增加磁珠用量；
(5)延长蛋白与磁珠孵育的时间；
(6)延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数。
提高目标蛋白纯度的参考方法：
(1)提高样品溶液和Binding Buffer中Imidazole、NaCl的浓度；
(2)样品和缓冲液中添加表面活性剂等物质；
(3)添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
(4)延长洗涤的时间，增加洗涤次数；
(5)采用梯度Imidazole浓度洗脱目标蛋白。
注意事项：
1. 首次使用本产品前，请务必详细阅读本说明书；
2. 磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作；
3. 在使用本产品前，请务必充分振荡使磁珠保持均匀的悬浮状态；
4. 请选用质量好的移液器吸头和离心管，以免磁珠贴壁或混合过程发生渗漏引起磁珠的损耗；
5. 磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠无法通过翻转离心管重悬磁珠，可采用移液器反复吹吸或短时漩涡混合使磁珠充分重悬；
6. 用户可根据实际需要保留经磁性分离移去的上清液，进行取样检测，以便分析纯化过程和优化蛋白纯化流程；
7. 本产品可以重复使用，当纯化性能降低时，建议进行再生处理；
8. 使用过的磁珠重复使用时，建议纯化同种蛋白，纯化不同种类的蛋白时，建议使用新的磁珠；
9. 本产品需与磁性分离器配套使用；
10. 本产品仅供研究使用。