- ￥600 - 2000
- ATCC
- XY-XB-1061
- 中国/美国
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 细胞类型：
科研
- 品系：
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- 组织来源：
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- 物种来源：
鼠/人/其它
- 细胞形态：
上皮样/成纤维样/其它
- 器官来源：
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- 运输方式：
常温运输/干冰运输
- 年限：
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- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 英文名：
MGC80-3
传授MGC80-3(胃癌细胞) 带证书细胞培养
细胞培养基本方法
细胞复苏步骤
一、所需仪器：
离心机
生物安全柜
电动移液器
CO2培养箱
倒置显微镜
液氮罐
恒温水浴锅
二、所需试剂：
胎牛血清（FBS）
无菌1×PBS pH=7.2
完全培养基
三、所需耗材：
离心管（15ml、50ml）
T-25细胞培养瓶
一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml）
四、操作步骤：
- 将恒温水浴锅中的水预热到37℃；
- 从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入恒温水浴锅中复温，工程中需要不断震荡冻存管以提高复温速率；
- 将融化了的冻存管中的用移液管转入一直装有5ml完全培养基的15ml离心管中，充分混匀后，300g离心5min；
（1）准备和安装过滤器
清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20 min进行高压灭菌处理。 在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。
(二)小牛血清的处理
市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。
1、 将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。
2、 处理后的血清贮存于4℃。
3、 小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。
(三)生长培养基的配制
除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。
培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。
按如下比例配制： 基本培养基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。 按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL，。
(四)冻存细胞的复苏
应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。
在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。
(五)传代:
贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。
悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。
(六)冻存
将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。
(七)注意事项
1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;
2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净，紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;
3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存;
4.消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20度保存;
5.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次。
6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕，然后用75%酒精擦拭，操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，如果数量较多，培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作，瓶与瓶之间应相隔一定的距离，开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧，打开后应用灯先烧口，然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。
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细胞冻存步骤
一、所需仪器：
-86℃超低温冰箱
离心机
生物安全柜
电动移液器
CO2培养箱
倒置显微镜
液氮罐
二、所需试剂：
胎牛血清（FBS）
细胞培养级DMSO
冻存液：80%FBS+20%DMSO
无菌1×PBS pH=7.2
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
isopropanol
三、所需耗材：
离心管（15ml、50ml）
T-25细胞培养瓶
一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml）
1.8ml冻存管
程序降温盒
四、操作步骤：
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压力容器生产许可证》，简称压力容器许可证。这个证是由压力容器的制造商向中国质量技术监督局申办的，每台仪器都会随机带一个同样机身号的压力容器生产许可证； 二、《进出口锅炉压力容器安全性能检验证书》，此证书应是在海关进口时，由进口商申报，海关通知相关特种设备检测机构进行的进口报关检测，某些地区，亦可由用户在到货30天内向当地特种设备检测机构申办。此证书为收费项目。 三、用户需拆取高压灭菌锅上的压力表和减压阀，送当地计量部门计量后取得计量证书。 三证齐备，方可取得符合
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