Ni-NTA His Bind Resin

特别提示：包括Ni-NTA His Bind Resin在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Ni-NTA His Bind Resin

产品货号：Ni-NTA His Bind Resin
产品规格：1ml（5根起订）/5ml（2根起订）/20ml/100ml

产品比对Qiagen研发，允诺产品质量与Qiagen一致
为满足终端客户需求，特推出1ml预装柱
Ni-NTA His Bind Resin主要特点和技术参数：
•相比其他偶联标记技术（如IDA），NTA标记结合能力强，同时体现出最低的非特异性吸附，洗脱蛋白纯度高；
•高洗脱率和高回收率（咪唑梯度完美洗脱，无拖尾）；
•更强的吸附能力，高结合容量（1mL可结合30mg 以上6xHis tag蛋白，Mw=50 KDa）；
•耐受范围广（各种变性剂、酸、碱等）；
保存条件：4°保存
可以使用在柱酶切的方法得到去除His-tag的目标蛋白。我们推荐TEV protease，因为这种酶的特异性较好，是带有Ni-NTA His Bind Resin的重组酶，方便除去

除了Ni-NTA His Bind Resin,，我公司还供应以下相关产品：



名称：1mL亲和层析柱
货号：BTN140649
规格：1mL
本产品适用范围广泛，可用于纯化分离重组蛋白、抗体和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA结合蛋白等生物大分子；还可以用于去除生物样品中的内毒素等污染。

亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而发明的纯化技术。它是利用生物分子间存在的特异性相互作用(如抗原－抗体、酶－底物或抑制剂、激素－受体等)，通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

亲和层析柱常见的使用方法有重力法、手动加压法、蠕动泵法，其示意图如下：


储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

常用亲和标签及纯化方案：


名称：Tris-甘氨酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)
货号：WE0283
规格：500ml

名称：包涵体蛋白溶解液
货号：SNM385
规格：100ml

名称：过硫酸*(代"铵")(粉剂)
货号：SNM397
规格：100g

名称：磷酸酶抑制剂混合物(100×)
货号：RFT192
规格：1ml|5×1ml
本品是一种用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物等蛋白提取及其它相关用途的磷酸酶抑制剂混合物(Imidazole，Sodium fluoride, Sodium tartrate dihydrate, Sodium molybdate，β-glycerophosphate and Sodium orthovanadate in H2O)，可广泛抑制蛋白提取物中的酸性、碱性、丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸酶。一个包装的本产品通常足够用于100ml的裂解液的配制。

细胞或组织等提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。本磷酸酶抑制剂混合物可以有效抑制常见磷酸酶对于蛋白的去磷酸化作用，保持蛋白原有的磷酸化状态。氟化*(代"钠")是酸性磷酸酶可逆抑制剂；咪唑是碱性磷酸酶抑制剂；β-甘油磷酸是丝氨酸/苏氨酸磷酸酶可逆抑制剂；正钒酸钠是碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶可逆抑制剂；酒石酸钠是酸性磷酸酶抑制剂。

本产品为经优化和测试的用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物蛋白提取的磷酸酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸/苏氨酸、酪氨酸、酸性及碱性磷酸酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例把磷酸酶抑制剂混合物加入裂解液中即可用于样品蛋白的提取，并有效抑制蛋白的去磷酸化。

使用方法：

1、使用前常温溶解磷酸酶抑制剂混合物 (100×)，混匀，按照1:100 比例加入到组织细胞裂解物中，如1 ml裂解物中加入10μl抑制剂混合物。磷酸酶含量特别丰富的组织，可以适当提高加入量，使其终浓度为2～3×。含有磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。根据需要，可以同时考虑添加适当的蛋白酶抑制剂混合物。
2、待所需的抑制剂添加完毕并混匀后，就可以开始进行样品的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

名称：人极低密度脂蛋白
货号：SY0448
规格：2mg
人源极低密度脂蛋白（Human Very Low Density Lipoprotein（Human VLDL）），d≤1.006 g/mL，来自健康人源血浆，超速离心纯化获得，通过琼脂糖电泳检测其均匀性和纯度。本产品为无菌充氮包装，可以直接稀释使用。

极低密度脂蛋白（VLDL）为一种由肝脏制造的脂蛋白，在血液中转换成低密度脂蛋白，其主要功能是传送内源性三酸甘油脂、胆固醇、磷脂和胆固醇脂。为五种主要的脂蛋白按照分子量大小，主要分为以下几种（从高到低）：乳糜（CM）、极低密度脂蛋白 (VLDL)、中间密度脂蛋白 (IDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白（HDL），VLDL可以使脂肪和胆固醇在水溶性的血液中移动。VLDL粒子直径为30~80 nm。

纯度（Purity by Agarose Gel）：＞98%
浓度 ：0.8-2.0 mg/ml
外观：乳状液体
缓冲液组分：1 µM EDTA in PBS, pH 7.4
储存条件：4℃，无菌避光，有效期6周

名称：总蛋白提取试剂盒
货号：HR0001
规格：50T/100T
总蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取总蛋白。配合其他组份时，也可以用于植物本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究实验。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒(相关产品HR0165)。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；磷酸酶抑制剂、蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 使用前请仔细阅读产品说明书。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．总蛋白提取液：含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 吸头、离心管 ● 移液器 ●冰盒 ●离心机 ● 涡旋振荡器 ●冰箱

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
● 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
●蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
● Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubμlin。
● 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。
细胞总蛋白提取：
悬浮细胞蛋白提取：
1．提取液制备：
每500μl冷的总蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物和2μl 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取5×106个细胞，在4℃，2500g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
【注】
①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
3．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每5×106 -1×107个细胞(大约50mg细胞，50μl细胞压积)中加入500μl冷的总蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
5.在4℃，14000g条件下离心15分钟。
6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
7．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
③ 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
④蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
贴壁细胞蛋白提取：
1．提取液制备：
每500μl冷的总蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物和2μl 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．小心吸取贴壁细胞的培养液。
3．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干PBS。
4．加入适量冷的总蛋白提取液，振荡15-30分钟，至细胞充分裂解，用细胞刮刀刮一遍，将裂解液吸入另一干净离心管。
【注】
① 推荐裂解液使用量：100mm培养皿500μl；60mm培养皿250μl；6孔板200μl/孔；24孔板100μl/孔；96孔板50μl/孔；75cm2培养瓶500μl。
② 也可用细胞刮刀刮下细胞或者用胰酶将细胞消化下来后按悬浮细胞操作步骤进行。
5．在4℃，14000g条件下离心15分钟。
6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
7．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
① 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织总蛋白提取：
1．提取液制备：
每500μl冷的总蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物和2μl 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取50-100mg组织样本用剪刀剪碎，加入总蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
【注】
① 如果组织样品很细小，可以剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。
② 也可用液氮研磨的方法，具体方法可以联系本公司hhsky1017@163.com 索取详细资料。
3．将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡10-20分钟。
4.在4℃，10000-14000g条件下离心15分钟。
5．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
6．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
① 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。