改良柠檬酸钠抗原修复液(50×)

改良柠檬酸钠抗原修复液(Improved Citrate Antigen Retrieval solution，50×)是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。细胞或组织用、福尔马林或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联，遮蔽样品抗原位点，导致免疫染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。采用了广泛使用的柠檬酸钠缓冲液(pH6.0)，可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。按照每个片子需要10ml抗原修复液(1×)计算，100ml抗原修复液(50×)可以用于500个样本的抗原修复。

组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。柠檬酸盐、EDTA或Tris等缓冲液在热的条件下可以使被福尔马林屏蔽的抗原重新暴露出来，同时又不会对抗原表位造成破坏，从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高诊断的准确率。

自备材料：
系列乙醇
双蒸水或去离子水
加热设备
免疫染色洗涤液
 
操作步骤(仅供参考)：
(一)石蜡切片
1、脱蜡至水
①二3次，每次3～5min。
②无水乙醇脱水2次，每次3～5min。
③95%的乙醇，3～5min。
④90%的乙醇，3～5min。                              
⑤80%的乙醇，3～5min。                            
⑥70%的乙醇，3～5min。                             
⑦蒸馏水冲洗2次，每次3～5min。                      
2、抗原修复
①用去离子水或双蒸水稀释改良柠檬酸钠抗原修复液(50×)至1×。
②将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95℃或沸水加热约10～30min。
③抗原修复液(1×)使用前需预热到95～100℃。如果使用微波炉加热，避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20～30min内冷却至室温。
3、免疫染色洗涤液洗涤1～2次，每次3～5min。
4、进行封闭等后续的免疫染色步骤。
(二)冰冻切片
1、用去离子水或双蒸水稀释改良柠檬酸钠抗原修复液(50×)至1×。
2、免疫染色洗涤液洗涤切片5min。
3、将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95℃或沸水加热约10～30min
4、抗原修复液(1×)使用前预热至95-100℃。如果使用微波炉加热，避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20～30min内冷却至室温。
5、免疫染色洗涤液洗涤1～2次，每次3～5min。
6、进行封闭等后续的免疫染色步骤。
(三)其它样品
其它样品参考石蜡切片或冰冻切片进行操作。
 
注意事项：
浸泡在抗原修复液(1×)中，佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。