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文献和实验光素酶活力。在完成萤火虫荧光素酶活力(“实验”报告基因)的测定后,萤火虫发光被快速湮灭,并同时激活海洋腔肠荧光素酶的发光反应(“对照” 报告基因)。因此,DLR测试系统整合了两个测试化学,对共表达的两个报告基因作快速地定量,酶来自转染细胞裂解液,或无细胞转录翻译反应。萤火虫荧光素酶测试的线性范围延伸达酶浓度的8个数量级,可测定≤1fg (大约10 -20 摩尔)的实验报告基因酶(图3A)。用双荧光素酶报告基因测试系统,海洋腔肠荧光素酶的线性范围达酶浓度的7个数量级,较低的底限是≤10fg (大约3×10 -19
细胞名称 293 和 293T种属人组织来源 293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用磷酸钙转染效率可高达50%。蛋白表达水平高,转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜的)蛋白的便捷方式。形态特点 上皮细胞致瘤性 +产物或抗原 大T抗原染色体核型 亚三倍体人细胞系。染色体众数为64,30%的细胞
关于293/293T细胞1、种属都为人,不是鼠。2、来源:293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高,转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。3、形态为上皮细胞,能致瘤。4、染色体核型:亚三倍体人细胞系。染色体众数为64,30
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