笃玛 鸡甲状腺激素自身抗体(THAA) ELISA 试剂盒

笃玛 鸡甲状腺激素自身抗体(THAA) ELISA 试剂盒   产品信息



ELISA 实验步骤：
1.包被抗原：稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液，多肽浓度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC过夜，洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭，0.1ml/孔，37oC1h，洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔，37oC 30分钟，洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔，37oC 40分钟，洗净。
5.显色：TMB显色
A液：四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液：5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。
终止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光显色10分钟，终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值
笃玛 鸡甲状腺激素自身抗体(THAA) ELISA 试剂盒   产品信息

Elisa试验操作中可能影响结果的原因及其相应的解决办法
    1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡至少30分钟。
    2 加样 可能原因： 1）血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法： 1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时，请分批操作。
    3 孵育 可能原因： 1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底； 2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。解决办法： 1) 贴封片或加盖； 2) 按说明步骤严格控制操作时间。
    4 洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。 3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法： 1) 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 2) 合理安排，或多用几台洗板机。
    5 显色 可能原因： 1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法： 1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时保持显色剂不外流； 3) A、B液应避免接触金属器械。
    6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸；尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时做好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。

笃玛 鸡甲状腺激素自身抗体(THAA) ELISA 试剂盒   产品信息

操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
500ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
250ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
125ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
62.5ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
31.25ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液


2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4. 配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。