自噬蛋白5/细胞凋亡的特异性蛋白抗体

抗体名称：自噬蛋白5/细胞凋亡的特异性蛋白抗体
英文名：Anti-APG5L
价格：电询
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免疫-PCR技术：
1、基本原理
免疫-PCR主要由两个部分组成即类似于普通酶联免疫吸附实验（ELISA）的抗原抗体反应和常规的PCR扩增和电泳检测。以一段特定的双链或单链DNA来标记抗体，用PCR扩增抗体所连接的DNA，并进行电泳检测，因此可由PCR产物的量来反映抗原分子的量。免疫-PCR结合了抗原抗体反应的特异性和PCR的高度敏感性，成为一种极为敏感的抗体依赖的抗原检测技术。
2、免疫-PCR的改进
将不同的抗体标上特异的DNA序列，形成一种新的、基于双抗夹心免疫模式的免疫-PCR，并可同时检测多种抗原，避免了免疫实验敏感性的限制和在一个实验中检测抗原的种类。免疫-PCR夹心模式可以用常规的免疫实验完成。这样就大大降低了原先免疫-PCR实验的复杂性，并减少了大量的操作时间。这种免疫-PCR系统的关键改进就是用异双功能化学关联剂制备标记DNA-抗体偶联物。
3、多分析物免疫-PCR
自噬蛋白5/细胞凋亡的特异性蛋白抗体制备过程如下：
（1）氨基修饰寡核苷酸与SATA反应，形成乙酰硫代乙酰修饰DNA。
（2）Sulfo-SMCC与抗体反应，形成马来酰亚胺修饰抗体。
（3）混合马来酰亚胺修饰抗体和乙酰硫代乙酰修饰DNA，并加入羟胺盐酸，在黑暗条件下反应，使抗体和标记DNA偶联。
（4）反应混合物用HPLC凝胶过滤纯化偶联物，收集的偶联物在4℃下保存。
在多分析物免疫-PCR实验中，几千个bp的dsDNA可以通过生物学和生物化学方法制备。通过PCR和单向缺失在以Puc18为基础的重组质粒上制备了各种长度、具有相同引物序列的的dsDNA，选择适合长度的dsDNA作为特异性抗体的标记物。而且dsDNA比ssDNA具有更高的稳定性。此外，长链DNA分子更容易用荧光标记和光吸收检测，并且可以引入更多的非同位素标记，序列长度的提高可以促进杂合检测。
 
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