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标本溶血:
1、脱水、休克等疾病使得穿刺困难而溶血;
2、抽血器质量不合格导致溶血;
3、血清分离不当导致溶血;
4、红细胞有先天或获得性缺陷而易破坏溶血;
5、患溶血性疾病。
溶血的干扰机理:
1、血细胞中浓度远高于血清浓度:血细胞中高浓度物质溢出,测定结果偏高。如K、CK、LDH、AST等,轻度溶血即可有很大影响。
2、血细胞中浓度低于血清浓度:此时溶血相当于血清稀释而结果偏低。如血糖、r-GT等。
、检测大多是检测化学反应前后颜色变化程度来计算待检物浓度。血红蛋白的红颜色会造成干扰。
控制影响因素:
开展常规项目的室内质量控制,绘制质控图和观察室内环境;谨慎使用检测方法学;
在使用某一方法时,先虑标本量是否太少或血清凝固,需重新处理标本进行测定;如果是采用速率法,要考虑是否是酶活力过高;动态反应曲线是否正常,注意有无提示数据报警;
仪器方面,如果发现某一时间的结果全部偏低,就要考虑是否引入了系统误差,是否发生仪器的样品针堵塞,搅拌棒搅拌不均等情况,或样品针注射器漏气,或试剂的交叉污染,或光源灯老化等问题;避免标本的溶血或脂血现象。
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文献和实验一、实验目的与原理蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现,如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合,即每克蛋白质结合1.4g的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷,它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,因而消除了蛋白质原有的电荷差别,使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量,而与蛋白质所带的电荷无关,在一定条件下,蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈
链的相对分子量。 4、有的蛋白质(如:电荷异常或结构异常的蛋白质;带有较大辅基的蛋白质)不能采用该法测相对分子量。 5、如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象,可能是SDS不纯引起。
对将目的蛋白清晰从分子量大小类似蛋白中清晰分离出来很重要,常见 SDS-PAGE 分离胶浓度为 8% 和 12.5% 两类,分子量大小不同靶蛋白应选择合适浓度分离胶。*选择脂质合成限速酶基因(ACC1,265kD)和甘油三酯酯酶(ATGL,55kD)用于探讨分离胶浓度分离效果,下文中除去探讨条件外其余条件皆一致。1.对分子量较大的蛋白质(>200kDa)2.对分子量较小的蛋白质((二)转膜条件*转膜时间、电压和转膜缓冲液甲醇比例等对结果影响较大,因此根据研究的靶蛋白特点选择合适转膜条件至关
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