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上海抚生
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文献和实验数可以提高反应的检出限,有文献报导当循环数从25增加到34个循环时,实时定量PCR的最低检出限可从106增加到103。但是并非循环数增加得越多,其敏感性就会越高,实际上,当循环数增加到某一值时,敏感性便不再升高,因为循环数并不是影响敏感性的唯一因素,而且在实验过程中,也不可能因为增加敏感性而无限制地增加循环数,这不仅是实践中行不通,而且在理论上也不可行,因为随着循环数的增加,一方面,聚积的产物会抑制Taq酶的活性,另一方面,也会增加形成异源二聚体的可能性,这些都会影响到最终的定量结果。 (3)Mg2+
定量PCR的最低检出限可从106增加到103。但是并非循环数增加得越多,其敏感性就会越高,实际上,当循环数增加到某一值时,敏感性便不再升高,因为循环数并不是影响敏感性的唯一因素,而且在实验过程中,也不可能因为增加敏感性而无限制地增加循环数,这不仅是实践中行不通,而且在理论上也不可行,因为随着循环数的增加,一方面,聚积的产物会抑制Taq酶的活性,另一方面,也会增加形成异源二聚体的可能性,这些都会影响到最终的定量结果。 (3)Mg2+的浓度:根据Roche公司的Lightcycler3.5版本技术说明,Mg
,而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II,以及来源于Haemophilus influenzae的Hind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA,产生可体外连接的基因片段。研究者很快发现内切酶是研究基因组成、功能及表达非常有用的工具。 当限制性内切酶的应用在上世纪七十年代流传开来的时候,以NEB为代表的许多公司开始寻找更多的限制性内切酶。除了某些病毒以外,限制
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