青霉素-链霉素（双抗）

培养细胞的保存和复苏

摇动使其急速融化，30秒至1分钟内完成。（5）细胞悬液低速离心，去除上清中的保护添加剂，加入原来使用的生长液，置37℃培养。基本设备和试剂设备（略），环境要求清洁、空气干燥和无烟尘。基本试剂培养液：①1640溶于新蒸的三次蒸馏水中，搅拌使其充分溶解，过滤除菌即可。②小牛血清用前56℃X30分钟灭活（破坏补体）分装置-20℃保存备用。③青链双抗液将100万单位的青霉素钠盐和硫酸链霉素用高压2次后的三蒸水100ml充分溶解，分装冻存于-20℃，使用前融化，每100ml生长液中加1ml，即使用终浓度为含

细胞培养常用试剂

（1）高糖DMEM溶液 用新配制的三蒸水配制，高糖DMEM干粉（规格10×1L），溶入约总量的1/3的三蒸水，并用水洗净包装袋，在磁力搅拌器上搅拌30分钟，加入NaHCO2 3.75克，补加水至最终量。用1N HCL调整PH为7.2，0.22μm滤膜抽滤除菌，分装-20℃保存，使用时加10%的胎牛血清及双抗溶液（最终浓度：青霉素100U/ml，链霉素 100μg/ml） （2） 胎牛血清 使用前56℃水浴30分钟灭活，无菌条件下分装成10ml包装，-20℃保存。用时

细胞培养中的污染

活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素