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- ATCC232091
- 美国/德国
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Listeriamonocytogenes
- 保质期：
1-2年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
斜面菌种：1-2个月。冻干菌种：5-10年
- 规格：
冻干粉一支
单增李斯特氏菌
资源名称 单增李斯特氏菌
种属 Listeriamonocytogenes
分离基物 家禽
提供形式 冻干物
安全等级 2
模式菌株 no
应用领域 培养基质控；肠道研究；食品检测；《GB4789.30-2010单核细胞增生李斯特氏菌检验》阳性对照菌株。ISO11133质控菌株。
培养方法
培养基 CM0217;脑心琼脂;心提取物5.0g，脑提取物12.5g，月示胨10.0g，葡萄糖2.0g，NaCl5.0g，Na2HPO42.5g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.4。
生长条件 37℃;好氧
存储条件 真空冷冻干燥法
详细说明
描述 G+短棒状小杆菌，有动力，过氧化氢酶阳性，血平板上产生β-溶血；硝酸盐还原实验阴性，尿素酶试验阴性，不发酵木糖、甘露醇；甲基红反应阳性，伏-普实验阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、鼠李糖；三糖铁试验产酸、不产硫化氢；兼性厌氧，最适pH7.4~7.6。血清型1型。
收到菌株操作：
1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
单增李斯特氏菌低温存法
①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月；②液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。
单增李斯特氏菌脱水存法
①沙土保存法，能产孢子的细菌、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。
② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。
③ 石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。
单增李斯特氏菌特别注意事项
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与我公司联系或更换新的菌种。
使优良菌种的性状保持稳定，人为地创造条件，使菌种的新陈代谢活动处于不活泼状态，即选取优良菌种的休眠体（孢子或芽孢）或富有生命力的悬浮液在低温或脱水状态下保存。
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文献和实验基反应可生成红色化合物。 为了获得有效的实验数据，实验菌种选用CICC,21633单增李斯特氏菌（以下简称单增菌），质控菌种选用CICC,10041蜡样芽孢杆菌（以下简称蜡样菌），V-P培养基选用同一厂家、同一批次、且在有效期内的生化管。 蜡样菌V-P培养基培养24h，滴加甲、乙液后30min内呈现阳性，证明试验用V-P培养基无质量问题。单增菌V-P培养基分别于30℃和37℃培养24h、48h、72h、96h，实验结果如下表。通过实验我们发现两种现象。其一，单增菌培养的时间
1、仔细查对标本标签与单是否正确，标本质量是否合格，若收标本与单查对正确，标本质量合格则进行接收，否则查找原因并在有关记录本上记录。 2、标本处理、与结果报告： 1)拭子、分泌物标本标本涂于普通血琼脂平板、巧克力(含V、X因子)平板成原始线，再以无菌接种环画线分离后置C02缸，35℃温箱培养。 培养第24、48、72小时观察各平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第5天未见可疑菌落，则报告未培养出奈瑟氏菌、嗜血杆菌等苛养菌。 2)尿液标本取5尿液,3000转/分离心5分钟
免疫金银及铁标记技术 免疫金技术发展史 早在一个世纪以前，化学家就对胶体金进行了研究，当时只是研究它的结构和金属性质。在1939年Kausche和Ruska把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察见金离子呈高电子密度。然而胶体金技术作为标记物应用于免疫组织化学研究是在1971年，Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原。此后，他们还把胶体金与抗胶原血清，植物血凝素，卵白
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