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- 美国/德国
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Streptomyces rimosus Sobin et al.
- 保质期：
1-2年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
斜面菌种：1-2个月。冻干菌种：5-10年
- 规格：
冻干粉一支
龟裂链霉菌
资源名称 龟裂链霉菌
种属 Streptomyces rimosus Sobin et al.
安全等级 1
模式菌株 no
应用领域 产土霉素
说明书 点击下载
培养方法
培养基 CPDA：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，琼脂15克，溶化后分装，15磅灭菌30分钟。
生长条件 28℃，好氧
收到菌株操作：
1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
龟裂链霉菌低温存法
①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月；②液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。
龟裂链霉菌脱水存法
①沙土保存法，能产孢子的细菌、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。
② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。
③ 石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。
龟裂链霉菌特别注意事项
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与我公司联系或更换新的菌种。
使优良菌种的性状保持稳定，人为地创造条件，使菌种的新陈代谢活动处于不活泼状态，即选取优良菌种的休眠体（孢子或芽孢）或富有生命力的悬浮液在低温或脱水状态下保存。
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文献和实验放线菌属于原核生物系统进化树上的（G＋C）摩尔百分含量（mol％）高的革兰氏阳性菌（Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学组分变化很大。在做大肠杆菌超声时，采用的是400W，破碎5s停5s的方法，效果不错，但是用在链霉菌上，由于细胞壁组成差异一般没什么效果。 链霉菌（放线菌）超声破碎前处理
遗传作图相关技术链霉菌孢子悬液的制备从已经长好的固体培养基上用棉签刮取孢子，使孢子悬浮于离心管中的无菌水中；将离心管放在振荡器上尽可能地激烈振荡1分钟左右；用装有脱脂棉的试管过滤悬液以除去菌丝片段和固体培养基碎片；3000转/分离心5-10分钟以使孢子沉淀，停止离心后马上倒掉上清液；将离心管在振荡器上振荡几秒钟使孢子沉淀物分散于残存的一点无菌水中；加入无菌的20%甘油于-20℃保存。链霉菌中NF的证明链霉菌中的普通致育型因子（NF）能够产生次甲基霉素，能将旁边不携带NF的链霉菌杀死。将待证明
1、将适量的菌体悬浮于500μl溶菌酶溶液（2%）中，37℃温育1hr 左右至完全溶菌，2、加入500μl碱性SDS溶液（0.3mol/L NaOH, 2%SDS），立即振荡混合完全，3、打开管盖，在70℃放置15min（对大于20kb的质粒则最好放在55℃， 30min），然后于水浴中冷却至室温，4、加入100μl酸性苯酚/氯仿溶液，用混合器振荡至液体彻底混合均匀，12000rpm离心5min,移取上清液，弃去白色中间层。5、用中性苯酚/氯仿重复抽提直至看不见（或非常少）中间
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