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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温干燥阴凉处
- 规格:
T25培养瓶
细胞培养的一般过程:
一、准备工作
1.器皿的清洁、干燥和消毒;
2.培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌;
3.无菌室或超净台的清洁与消毒;
4.培养箱及其他仪器的检查与调试等等。
二、取材
在无菌环境下从机体取出某种组织细胞。理论上各种动物和人体组织都可用于培养,但幼体组织尤其是胚胎组织更易培养。取材时应在无菌环境下尽快处理并培养。
三、培养
1.组织块培养,直接放置于器皿底部,几个小时后再加入培养基;细胞系培养,先行计数,按一定量接入器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后立即放入培养箱中,使细胞今早进入生长状态。
2.每隔一定时间观察细胞生长状况、形态、有无污染、PH值以及二氧化碳浓度等等。
3.原代细胞一般有一段潜伏期,潜伏期内细胞不分裂,但可贴壁或游走。过了潜伏期细胞便进入分裂期。细胞长满平底之后要代传培养。
四、冻存及复苏
一般采用-196℃的液氮冻存,冻存管中加入含有保护剂的培养基。复苏即从液氮中取出冻存管后,立即放入37℃的水中迅速融解,然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
细胞培养的无菌环境:
一、无菌室
无菌室一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分构成。无菌室需要定期消毒以保持无菌的状态,此外,还应注意防止污染。
二、超净工作台
超净工作台可分为测流式、直流式和外流式三种类型。超净台的平均风速应保持在0.32-0.48m/s为宜,过大或过小均不利于保持净化度;使用前最好开启紫外灯照射10-30分钟,然后预工作10-15分钟,以出去臭氧和其他空气杂质;使用完毕后,要用70%的酒精将台面和台内四周擦拭干净;此外还要定期用福尔马林熏蒸台面。
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