1.5ml可立无色冻存管

原代细胞冻存技术

原代细胞冻存技术：1、选用生长情况好，数量较多的原代细胞，冻存前一天换液一次。2、贴壁细胞需用0.25％胰酶常规消化将细胞消化下来，将细胞悬液收集至离心管中。3、1000rpm离心5分钟，弃上清液。4、沉淀加含DMSO的培养液，计数，调整至（1-10）×106 /ml。5、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。6、密封冻存管，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。7、用记号笔标明细胞种类，冻存日期。8、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（－80℃过夜）→液氮。

做细胞冻存的人都经历过这些致命败笔！你逃过了吗？

在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。故介绍一些致命的 “败笔”，和解决方法。 希望对大家有帮助。 （ 以 Raji 为例） 一、细胞冻存： 1. 错误的时机： 细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已 经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。 解决： 最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。 2. 细胞太少： 冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。 解决： 离心后调整细胞

培养细胞的保存和复苏

长期保存。（4）复苏：急速融化复苏可防止损害细胞。冻结细胞从液氮中取出后，应立即放入37℃~43℃的水浴中，30秒至一分钟内融化。2、冻存与复苏方法适用于原始组织、原代细胞和细胞系（株）。（1）细胞用胰蛋白酶+EDTA消化后用冻存液稀至2~5X106/ml。（2）分装于2ml冻存管中，装量1ml，封口，作好标记，用几层纱布扎好。（3） 冻存管进入液氮前应有一个渐降温的过程，以1℃/min的速度降温，一般挂在液氮上空8小时后，投入液氮贮存罐中长期保存。（4）为使冻存的细胞复苏，将冻存管置于37℃~43℃水浴中，充分