G6PD检测试剂盒，比色法

G6PD检测试剂盒，比色法
Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测葡萄糖的试剂盒，葡萄糖-6 - 磷酸脱氢酶（ G6PD）催化葡萄糖-6 - 磷酸转化为6 - phosphoglucono -δ-内酯，所述第一和限速步骤中戊糖磷酸途径。这是至关重要的代谢途径，它提供通过维持辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ NADPH）的水平降低了能量的细胞（如红细胞），以及用于生产戊糖。 NADPH的生产是非常重要的用于脂肪酸和/或类异二烯，如肝，乳腺，脂肪组织，和肾上腺生物合成的组织。该NADPH还保持谷胱甘肽在这些细胞的水平，有助于保护红血细胞免受氧化损伤。G6PD缺乏易患个人非免疫性溶血性贫血。 AAT Bioquest的Amplite 荧光葡萄糖-6 - 磷酸脱氢酶检测试剂盒提供了用于生物样品如血清，血浆，尿液，以及细胞培养样品中检测G6PD缺乏一种简单，灵敏，快速基于荧光的方法。在酶偶联测定法，比例是专门由一个荧光NADPH的传感器监测，以得到高的红色荧光产物的浓度。荧光信号可在EX/ EM = 540 nm/590 nm处读取荧光酶标仪。与G6PD检测试剂盒，我们能够探测到小至 1 mU/ml G6PD在100 μL的反应体积。
产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备G6PD工作溶液（50 µL）
2.添加G6PD标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测在A575nm / A605nm处的吸光度比增加

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADP储备溶液（100X）：
在NADP小瓶（组分C）中加入100 µL H₂O，制成100X NADP储备溶液。

1.2 G6PD标准溶液（100 U / mL）：
将100 µL H2O或1X PBS缓冲液加到G6PD Standard（组分D）的小瓶中，制成100 U / mL G6PD标准溶液。

2.标准溶液

G6PD标准
将10 µL 100 U / mL G6PD标准溶液添加到990 µL 1x PBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL G6PD标准溶液。 取1000 mU / mL G6PD标准溶液，并在1x PBS缓冲液中进行1：3系列稀释，以得到系列稀释的G6PD标准液（G6PD7-G6PD1）。 注意：稀释的G6PD标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中，并充分混合。

3.2 将50 µL 100X NADP储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成G6PD工作溶液。 注意：此G6PD工作溶液足以用于一个96孔板。 它在室温下不稳定，应在2小时内及时使用。 避免暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1. G6PD标准品和测试样品在白色透明底部96孔微孔板中的布局。 G6PD = D-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标准品（G6PD1-G6PD7，0.4至300 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
G6PD1	G6PD1	...	...
G6PD2	G6PD2	...	...
G6PD3	G6PD3
G6PD4	G6PD4
G6PD5	G6PD5
G6PD6	G6PD6
G6PD7	G6PD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
G6PD1-G6PD7	50ul	连续稀释液（0.4至300 mU / mL）
BL	50ul	稀释缓冲液
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和表2提供的布局，准备G6PD标准品（G6PD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向G6PD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G6PD工作溶液，以使G6PD测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G6PD工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.使用酶标仪在A575nm / A605nm处监测吸光度的增加。

参考文献

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