胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake As

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      Cystine Uptake Assay Kit

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      胱氨酸摄取能力检测试剂盒

    • 供应商

      胱氨酸摄取能力检测试剂盒

    • 规格

      100T

    胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit

    产品概述

    胱氨酸(Cystine)是抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)的来源,在细胞内的氧化还原平衡中发挥着重要的作用。在癌症研究领域,SulfasalazineErastinxCT(胱氨酸/谷氨酸反向转运体)抑制剂可以改变细胞内的氧化应激平衡,进而引发细胞死之一的铁死亡。而在免疫研究领域,据报道,巨噬细胞和中性粒细胞在免疫刺激剂的作用下,xCT的表达会增高并增加细胞内的GSH水平,以平衡自身出于攻击癌细胞目的所释放的ROS。因此,无论是对癌细胞的研究还是免疫细胞的研究都离不开胱氨酸摄取能力这一重要指标。

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    检测原理

    试剂盒内含的胱氨酸类似物(Cystine Analog, CA)与胱氨酸一样可以通过xCT的转运进入细胞内。细胞裂解后通过添加Reducing Agent还原CA并与检测试剂FOdA特异性反应,生成可产生荧光的物质。[专利申请中]

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    3:胱氨酸类似物(CA)进入细胞后会被分解、代谢掉吗?
    A3:胱氨酸类似物(CA)的构造非常稳定,实验范围内的操作不会被分解或代谢。
    Q4:可以用这个试剂盒进行定量检测胱氨酸吗?
    A4:本试剂盒不是胱氨酸定量检测试剂盒。
    Q5:可以用这个试剂盒对进入细胞内的胱氨酸定量检测吗?
    A5:不能定量检测进入细胞内的胱氨酸,本试剂盒是针对细胞摄取胱氨酸能力的数值化检测试剂盒。
    Q6:样品间荧光几乎无差异时,应该如何确认改善?
    A6:

    请检查以下五点。

    1. 细胞数量发生变化。 

       根据细胞数或蛋白质浓度校正测量值(荧光强度)。

     更多信息,请参阅常见问题9

    2.胱氨酸类似物尚未完全融入细胞。

    请按以下目的对说明书中各操作时间进行调整

    . 在无胱氨酸培养基中培养的时间(贴壁细胞操作 3,悬浮细胞操作 4):5 - 30 分钟。

    . 胱氨酸类似物吸收时间(贴壁细胞操作 4,悬浮细胞操作 5):30 - 60 分钟。

    3.未被细胞吸收的胱氨酸类似物残留在孔中,导致本底升高。

    用 PBS 重复清洗(贴壁细胞:操作 5,悬浮细胞:操作 6)。

    4.工作溶液降解,背景升高。

    配置工作液一段时间后,工作液中的荧光染料可能会被降解,荧光强度可能会增加。

    配置工作液后不要等待太长时间。

    5.细胞类型的影响

       不同类型的细胞对胱氨酸的吸收能力大不相同,吸收能力低的细胞本底可能相对较高。 下图显示了不同癌细胞对胱氨酸吸收能力的差异。 如果无法通过上述措施解决本底问题,我们建议您首先考虑常见问题中列出的经过验证的细胞类型。

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