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枯草芽孢杆菌枯草亚种

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    • 英文名

      Bacillus subtilis subsp. subtilis

    • 保质期

      1-2年

    • 供应商

      上海联迈生物工程有限公司

    • 保存条件

      斜面菌种:1-2个月。冻干菌种:5-10年

    • 规格

      冻干粉一支

    产品细节图片1
    枯草芽孢杆菌枯草亚种
    资源名称    枯草芽孢杆菌枯草亚种
    种属    Bacillus subtilis subsp. subtilis
    提供形式    冻干管,斜面培养物
    安全等级    1
    模式菌株    no
    应用领域    产γ-聚谷氨酸,用于提取聚谷氨酸。
    培养方法
    培养基    豆芽汁、蔗糖培养基: 豆芽汁 100.0ml,蔗糖 5.0g,琼脂1.5~2.0g,自然pH。[注] 豆芽汁的制作:大豆芽500g(刚出芽即可),加水2500ml,煮沸浓缩至约1000ml时,过滤待用。
    传代方法    ①冻干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂轮在冻干管壁划两圈,掰断,用200μL无菌水或培养基充分溶解,平板涂布,活化培养。 ②斜面:试管口用75%酒精擦拭后,火焰灼烧,后用无菌接种铲切块,挑取接入平板或斜面,培养。
    生长条件    30℃,好氧。
    生长特性    G+,杆状,形成芽胞,利用葡萄糖、蔗糖、木糖、甘露醇;最适生长温度28-40℃。
    存储条件    2-8℃冷藏,真空冷冻干燥法
    收到菌株操作:
    1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
    2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。
    3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长
    4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
    5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
    枯草芽孢杆菌枯草亚种低温存法
    ①简单保存法,将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过12个月,若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达34个月;②液氮超低温保存法,将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中,密封于安瓿管内,然后控制冷却速度,使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时,即可置于-150-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物,都可用此法长期保存。
    枯草芽孢杆菌枯草亚种脱水存法
    ①沙土保存法,能产孢子的细菌、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合,经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌23次,烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子,用无菌蒸馏水22.5ml制成孢子悬液,吸取少许加入沙土管中,经真空抽干,外观呈松散状态,4℃冰箱保存,保存期可达57年。
    冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂(一般用脱脂牛奶或血清)相混合,放在安瓿管内于-20-30℃的乙醇浴中速冻。然后,在低温下用真空泵抽干,并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻,熔封安瓿管,于低温下保存。保存期可达510年之久。
    石蜡油封存法,在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低温干燥处保存,此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物,保存期为一年以上。
    枯草芽孢杆菌枯草亚种特别注意事项
    l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
    2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
    3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10;
    4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时与我公司联系或更换新的菌种。
    使优良菌种的性状保持稳定,人为地创造条件,使菌种的新陈代谢活动处于不活泼状态,即选取优良菌种的休眠体(孢子或芽孢)或富有生命力的悬浮液在低温或脱水状态下保存。

     

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