溶酶体pH值检测试剂盒

【求助】请问将含荧光素酶报告基因的质粒转染到真核细胞中，建立稳定的细胞系，用哪种转染方法比较好？中间有什么细节是值得注意的

lsdcfhyj 请教前辈，将含荧光素酶报告基因的质粒转染到真核细胞中，建立稳定的细胞系，用哪种转染方法比较好？中间有什么细节是值得注意的 chenjing198345 如果lab经费充裕的话可以用试剂盒包装慢病毒，然后感染真核细胞，完全按照protocol做就行，没啥特别的，sbi的kit不错。如果经费有限，一般是用磷酸钙转染法，这种方法在《分子克隆》里面有介绍，缓冲液的ph值很关键。 lsdcfhyj

荧光标记怎么选择？

内，大多数细胞器内及细胞质的pH值都在 7.0 左右，然而溶酶体内的 pH 值就比较低，mCherry 的 PK 值比较低，可以用于标记溶酶体内的蛋白。 光稳定性：荧光蛋白被不断激发的过程中，会逐渐失去发光能力。对于高质量成像、荧光信号定量分析以及详细描述生物模型，需要选择光稳定性好的荧光蛋白。在普通荧光成像中，例如激光共聚焦对光稳定性要求不是很高，而超分辨荧光成像对光稳定性要求比较高。 成熟时间：指荧光蛋白翻译后正确折叠并形成发光结构所需的时间。成熟时间较长的荧光蛋白不适合标记短寿命的蛋白，目的

休克(shock)

在休克中，由于组织缺血、缺氧，影响了供能系统，造成膜的不稳定，引起溶酶体酶的外漏，造成细胞与机体的损伤。溶酶体的酶外漏的可能机理是：由于缺氧，引起细胞pH值的下降，酸性水解酶活化，水解溶酶体的膜, 使膜漏增强，最终导致溶酶体膜破裂，溶酶体酶释放，使细胞组织自溶；而三羧酸循环的受阻影响细胞氧化磷酸化的过程，ATP减少，功能不足，钠泵失灵，组织内渗透压下降，导致溶酶体膜的通透性增高，酶释放，组织自溶。因此，在抢救休克病人时，临床上采用大剂量的糖皮质类固醇，以稳定溶酶体的膜。