线粒体呼吸链复合物V试剂盒(F0F1-ATP酶/ATP合成酶

特别提示：包括线粒体呼吸链复合物V试剂盒(F0F1-ATP酶/ATP合成酶)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：线粒体呼吸链复合物V试剂盒(F0F1-ATP酶/ATP合成酶)
英文名称：Electron transport chain Complex V assay kit
产品规格：20管/10样

检测指标：线粒体呼吸链复合物V
线粒体呼吸链复合物V（F0F1-ATP 酶/ATP 合成酶）活性光谱法定量检测试剂是一种旨在使用丙*(代"酮")酸激酶和乳酸脱*酶连续循环法反应系统，测定与ATP 合成对应的ATP 水解产生ADP 过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光谱法测定样品中酶活性的权威而经典的
技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的F0F1-ATP 酶/ATP 合成酶的特异性活性检测。可用于心肌、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

线粒体呼吸链复合物V，通常称为ATP合成酶（ATP synthase）、F型ATP酶（F type ATPase）和F1F0 ATP酶（F1F0ATPase），是线粒体氧化磷酸化的终极反应。其分子量为500KD，含有十六个亚单位，其中两个：ATP酶6和8为线粒体DNA编码的。ATP酶主要有两个结构域：F0为质子通道，由几个膜蛋白构成，包括a、b、c、d、
e、F6、A6L、OSCP（oligomycin sensitive conferring protein）等；和F1催化活性结构域，由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其最特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。复合物V的主要功能在于产生大部分细胞所需的能量ATP。ATP的合成需要线粒体内膜电子传递到氧分子时，呼吸链蛋白所产生的质子梯度变化。质子通过F0结构域传递到基质，激活F1催化活性结构域，促使ATP合成。该酶异常会导致心肌和神经系统疾病。基于ATP，在寡霉素参与下，受到F1F0 ATP酶的水解，进而通过丙*(代"酮")酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱*酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamideadenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），产生的吸光峰值的变化（340nm），来定量分析F1F0 ATP酶活性。

试剂盒组份：
缓冲液（Reagent A） ×20 毫升
反应液（Reagent B） ×2.5 毫升
阴性液（Reagent C） ×2 毫升
底物液（Reagent D） ×500 微升
专性液（Reagent E） ×250 微升

注意事项
1． 本产品为21 次操作（10 个样本），包括1 次背景对照
2． 操作时，须戴手套
3． 系统操作过程中，背景测定只需1 次
4． 线粒体样品检测前，建议冻存融解（－70℃至37℃）循环3 次
5． 如果增强酶活检测，建议使用线粒体复合物待测样品预处理试剂盒
6． 建议线粒体悬液使用0.25 M SUCROSE 和2 mM EDTA，pH9.0；忌用磷酸缓冲溶液
7． 建议使用线粒体裂解悬液，而不是细胞裂解悬液。如果使用细胞裂解悬液，第一须澄清；第二须加50微克。
8． 加入样品后3 秒内即刻光谱测定
9． 反应1 分钟后光谱测定值趋于稳定；测定值由高到低变化；测定可以持续5 分钟
10．测定值由高到低变化，即0 分钟测定读数高于1 分钟或5 分钟测定读数，表明有酶活性
11．光谱测定后，比色皿须清洗彻底
12．建议待测样本线粒体蛋白浓度为10 微克/100 微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；注意计算公式的调整（本公司提供线粒体溶解试剂盒S10018 为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒）
13．样品特异活性是指寡霉素敏感的ATP 合成酶，去除其它干扰因素（例如复合物I/II/III/IV 等）
14．线粒体呼吸链复合物V 酶活性单位浓度定义：在30℃温度下，pH 7.5 条件下，每分钟内能够氧化1 微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作为一个活性单位