笃玛 鸡双肾上腺皮质激素(DCX) ELISA 试剂盒

鸡双肾上腺皮质激素(DCX) ELISA 试剂盒
标准样品准备
1． 移取xx微升 标准液（Reagent F）到新的1.5毫升离心管
2． 加入xx微升 稳定液（Reagent B），混匀
3． 放在冰槽里待测

测定准备

1． 准备好待测样品，置于冰槽里
2． 设定好分光光度仪：波长670nm，并置零
鸡双肾上腺皮质激素(DCX) ELISA 试剂盒
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

鸡双肾上腺皮质激素(DCX) ELISA 试剂盒
Elisa试验操作中可能影响结果的原因及其相应的解决办法
    1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡至少30分钟。
    2 加样 可能原因： 1）血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法： 1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时，请分批操作。
    3 孵育 可能原因： 1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底； 2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。解决办法： 1) 贴封片或加盖； 2) 按说明步骤严格控制操作时间。
    4 洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。 3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法： 1) 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 2) 合理安排，或多用几台洗板机。
    5 显色 可能原因： 1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法： 1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时保持显色剂不外流； 3) A、B液应避免接触金属器械。
    6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸；尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时做好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。