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- 英文名:
磷酸酶抑制剂混合物
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1年
- 供应商:
上海沪震实业有限公司
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-20℃避光保存,避免反复冻融。孵育缓冲液2-8℃保存
- 规格:
1ml/5ml
磷酸酶抑制剂混合物
产品概述
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储存条件:
2-8℃保存。
磷酸酶抑制剂混合物有效期:一年。
产品简介:
组织细胞裂解过程中释放大量内源性蛋白磷酸酶,以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化。本蛋白磷酸酶抑制剂混合物包含6 种独立的蛋白磷酸酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白磷酸酶活性。该混合物优化的组成使其可以强烈几乎所有重要的蛋白磷酸酶活性,包括蛋白丝/苏氨酸磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。该混合物为100 倍浓缩水溶液,可用于直接加入任何组织类型和细胞的裂解产物中,均能有效抑制磷酸化蛋白质的去磷酸化,从而维护蛋白质的磷酸化状态。适用于Western Blot 和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。
磷酸酶抑制剂混合物使用方法:按照 1:100 比例,将混合物加入组织细胞裂解液中,混匀即可。
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文献和实验最近很多人问毛老师关于磷酸化的问题。比如:要检测的蛋白有磷酸化的,要加磷酸酶抑制剂吗?在做 erk1/2 磷酸化表达实验,提取总蛋白的时候需要加入磷酸酶抑制剂,什么抑制剂比较好?答案是:当然必须一定要加啊!毛老师来给大家简单解释一下。许多生物学过程和通路的调节都伴随着磷酸酯的形成和去除。而蛋白的磷酸化状态的平衡是由蛋白激酶和磷酸酶相互影响达到的。其中一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态。在细胞裂解的过程中溶酶体释放大量蛋白酶对磷酸化蛋白会产生极大影响,所以需要磷酸酶抑制剂对磷酸
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意:在准备做磷酸(酯)酶实验的时候,不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe: 1.称取 790 mg 的 Tris-Base,加到 75 ml 去离子水中,加入 900 mg 的 NaCl,搅拌
signaling公司的Phospho-PI3K p85 (Tyr458)/p55(Tyr199) 我自己分析没有条带无非是细胞状态不好,或者抗体不好,不知道还有没有可能是没有加磷酸化酶抑制剂,以至于磷酸化的蛋白被去磷酸化了? 谢谢啦~ yhwangcams 检测内参蛋白如GAPDH,ACTIN,TUBULIN是否成功? 用PLB裂解细胞得到的蛋白适合做REPORTER,做WESTERN不太合适。建议可以用其他BUFFER裂解蛋白。
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