血清封闭剂试剂盒

免疫组化技术实用案例课程：第一期

案例一：DAB染色后切片着色一片黄/背景深 背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。 我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合适（Santa Cruz公司1：200），等做第二批时发现封闭血清不够了，为了保证实验顺利进行，我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒，同时抗体稀释液也不够了，我又重新从博士

免疫组化染色方法及常用抗原修复方法

。6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。7）滴加 Ⅰ 抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。8）PBS洗三次每次2分钟。9）滴加生物素化二抗,20℃～37℃ 20 分钟。10）PBC 洗 3 次每次 2 分钟。11）滴加试剂SABC，20℃～37℃ 20 分钟。12）PBS 洗 4 次每次 5 分钟。13）DAB 显色：DAB 显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。14）蒸馏水洗。苏木素复染 2 分钟、盐酸酒精分化。15）脱水、透明

免疫组化经验总结

保护抗原和固定组织作用，过氧化氢孵育时间过长易引起脱片；现用现配，配好后4 ℃避光保存。不过，现在已有"第二代即用型免疫组化试剂盒"避免内源性生物素的干扰，推荐使用。   7）血清封闭 组织切片上有剩余的位点可以与一抗非特异性结合，造成后续结果的假阳性；封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合；也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。一般室温 10-30 min。但也要防止封闭过度 8）一抗和二