硬组织线粒体分离试剂盒

特别提示：包括硬组织线粒体分离试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：硬组织线粒体分离试剂盒
产品货号：GL0237
产品规格：50T

用途：
适用于快速从动物硬组织(心肌、骨骼肌)或其他难以分离线粒体的组织中提取线粒体。

注意事项：
采用梯度离心法分离线粒体外膜和内膜以及基质膜，大部分获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜

储存条件：-20℃，12个月

除了硬组织线粒体分离试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：Percoll
货号：BTN131134
规格：250mL
Percoll是一种常用的低粘度的密度梯度介质，由直径在15-30nm的硅胶颗粒组成，颗粒外包被了聚乙*吡*烷酮(PVP)，为化学惰性，不会影响细胞的活性。

产品特点：
1．Percoll渗透压很低(<20mosm/kg H2O)，粘度也很小，可形成高达1.3g／ml 密度。
2．采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。
3．离心后能形成1-1.3g/mL的密度梯度，可用于分离各种悬浮的细胞、线粒体、叶绿体和病毒(可小到70S)。
4．由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
5．Percoll溶液高压灭菌，必须进行不添加盐或蔗糖。盐的存在会引起percoll糊化，蔗糖的存在会引起焦糖化。

储存条件：常温运输和保存，有效期五年(未开封状态)。

使用方法：
1．不同浓度(密度)Percoll溶液的制备：先用9 份Percoll与1份 8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。

Percoll浓度(％)	70	60	50	40	30	20
比重g/ml	1.090	1.077	1.067	1.056	1.043	1.031

2．不连续密度梯度Percoll层的制备：先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll 比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
3．装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
4．离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll 之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。
5．取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll 层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

分离纯化细胞举例
1．富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五种不同密度的Percoll,如用10ml 试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2～1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×10８悬于１ml培基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK 杀伤活性的LGL细胞位于42.5％与45％Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
2．纯化淋巴母细胞和除去死细胞：分别叠加50％和30％Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者)，按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞；两层Percoll之间为淋巴母细胞，纯度和回收率在80％以上，位于30％Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。